[发明专利]牛副流感病毒PBIV3-B株及其应用

说明书

本发明公开了牛副流感病毒PBIV3‑B株及应用，本发明的牛副流感病毒PBIV3‑B株具有免疫原性好、培养特性好等优点，将本发明的牛副流感病毒(PBIV3‑B株)接种MDBK细胞，收获培养物，用β‑丙内酯(β‑propiolactone)灭活后，与法国赛比克公司的商品化Montanide^TM ISA15AVG佐剂混合乳化制成牛副流感病毒灭活疫苗。实验证明，使用本发明制备得到的牛副流感病毒灭活疫苗免疫断奶健康阴性牛能够预防由牛副流感病毒3型引起的疾病，而且此疫苗具有安全、产生抗体快、免疫期持久等优点。

技术领域

本发明属于生物领域，更具体的，属于生物疫苗领域，涉及一种牛传染性鼻气管炎病毒及其应用，特别涉及一株自行分离得到的牛副流感病毒PBIV3-B株以及由该病毒株制备得到的灭活疫苗。

背景技术

牛副流感是由牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza virus 3，PBIV3)所引起的一种急性、接触性传染病，又称“运输热”。PBIV3属于副黏病毒科、副黏病毒属，是单股负链有囊膜的RNA病毒，主要引起牛和其他反刍动物急性呼吸道疾病。1959年，Reisinger等从美国的犊牛肾脏中首次分离到PBIV3。之后，法国、前苏联、日本、丹麦、加拿大、澳大利亚、巴拿马和意大利等国也相继分离出该病毒。1966年，在埃及出现了关于PBIV3的早期报道。Gulliksen等对挪威的PBIV3进行血清学调查发现，PBIV3的血清阳性率较高，达到50.2％。目前，PBIV3的感染已呈世界性分布。从我国的血清学调查结果可知，PBIV3在我国感染严重、分布广泛，多数省市均存在PBIV3的感染，省区的平均阳性率高达91.08％。经流行病学调查和病原学检测显示，PBIV3在牛呼吸道疾病综合征中起重要的作用。

PBIV3的预防主要以疫苗为主。早期的PBIV3疫苗以灭活苗及弱毒苗为主且多为对抗牛多种呼吸系统病原的联合疫苗。研究表明，PBIV3疫苗免疫1年后仍可在血清中检测到中和保护抗体且具有免疫记忆。目前，国内还没有商品化的牛副流感病毒疫苗及检测试剂。

本发明的发明人在2015年从山东某牛场分离到一株牛副流感病毒3型，经实验室鉴定为强毒株，驯化克隆后的毒株命名为PBIV3-B株。利用PBIV3-B株，开展了牛副流感病毒灭活疫苗的研制开发工作，筛选培育出免疫原性良好、效价稳定的牛副流感病毒PBIV3-B株，选择了最适合该病毒增殖的MDBK细胞和符合制造疫苗的灭活剂、佐剂及其他条件。对制品的生产工艺、安全性、保护率、免疫程序、最小剂量、抗体持续期和保存期等都进行了试验测定，并获得了大量的试验数据，证明本疫苗安全有效。在此基础上，进行了中试生产，经抽样检验，全部符合拟定的质量标准，并对中试产品进行了安全试验和效力试验，其结果也证实本疫苗能有效地预防由牛副流感病毒引起的牛呼吸道疾病，在实验室试验、中间试制的基础上，本发明研制出了牛副流感病毒PBIV3-B株灭活疫苗，其结果也证实本疫苗能有效地预防由牛副流感病毒引起的牛呼吸道疾病，进一步验证了本疫苗的各项质量标准。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种免疫原性良好、效价稳定的牛副流感病毒株；

本发明的目的之二是提供所述的牛副流感病毒株在制备疫苗中的应用；

本发明的目的之三是提供一种由所述的牛副流感病毒株制备得到的疫苗；

本发明的目的之四是提供所述的疫苗在制备预防牛副流感病毒病药物中应用。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

本发明的发明人在2015年从山东某牛场分离到一株牛副流感病毒3型，经实验室鉴定为强毒株，驯化后的毒株命名为PBIV3-B株。本发明的PBIV3-B株是从发生典型牛副流感病毒3型感染牛中分离获得的，因此与分离到的其它毒株相比在细胞上的增殖滴度高，对牛的免疫原性好。经MDBK细胞传代后作为疫苗毒种，效检用强毒为PBIV3-B株第7～10代。该毒株可以引起MDBK细胞90％以上感染。