[发明专利]一种检测CALR基因突变的内参扩增引物组合物及其扩增体系有效
| 申请号： | 201710560138.0 | 申请日： | 2017-07-11 |
| 公开（公告）号： | CN107164538B | 公开（公告）日： | 2021-03-02 |
| 发明（设计）人： | 曹国君;关明;周连群;张威;马玮哲;康志华;张心菊;黄秀;邓萱;许笑;邢志芳 | 申请（专利权）人： | 复旦大学附属华山医院;中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858;C12Q1/6886;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海申新律师事务所 31272 | 代理人： | 竺路玲 |
| 地址： | 200040 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 calr 基因突变 内参 扩增 引物 组合 及其 体系 | ||
1.一种检测CALR基因突变的内参扩增体系，其特征在于，包括如SEQ ID NO：1所示的F3引物、如SEQ ID NO：2所示的B3引物、如SEQ ID NO：3所示的FIP引物、如SEQ ID NO：4所示的BIP引物、如SEQ ID NO：5所示的LF引物以及如SEQ ID NO：6所示的LB引物组成的内参扩增引物组合物；在所述内参扩增体系中，所述F3引物和B3引物的终浓度均为0.2μmol/L；所述FIP引物和BIP引物的终浓度均为1.6μmol/L；所述LF引物和LB引物的终浓度均为0.8μmol/L；
所述内参扩增体系还包括反应缓冲液、Bst DNA 聚合酶、钙黄绿素、去离子水、DNA模板；
所述内参扩增体系的总体积为25μL，其包括2 ×反应缓冲液12.5μL，引物F3：1μL，引物B3：1μL，引物FIP：0.5 μL，引物BIP：1μL，引物LF：1μL，引物LB：1μL，Bst DNA 聚合酶1μL，钙黄绿素 1μL，去离子水3.0μL，DNA模板2μL。
2.一种用于非诊断和治疗目的的检测CALR基因突变的方法，其特征在于，以被测样本的DNA模板，采用如权利要求1所述的内参扩增引物体系进行LAMP反应，然后进行可视化判读来鉴定样本是否为CALR基因突变阳性。
3.根据权利要求2所述的检测CALR基因突变的方法，其特征在于，所述LAMP反应的条件为：55~70℃，30~60min。
4.根据权利要求3所述的检测CALR基因突变的方法，其特征在于，所述LAMP反应的条件为：63~68℃，60min。
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