[发明专利]水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E基因表达载体及其重组酵母菌株与应用

权利要求书

1.水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E基因表达载体，其特征在于：所述载体为如SEQ ID NO：1所示的水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E的基因全序列与pGAPZαA的连接体。

2.一种水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E基因表达载体，其特征在于，所述载体的构建方法包括如下步骤：

步骤A、设计引物，根据gE基因序列和pGAPZαA上的多克隆位点序列分别设计引物，以实现在目的片段两端分别添加EcoR I和Not I酶切位点；

步骤B、构建重组载体，将扩增后gE基因片段和pGAPZαA经双酶切后连接，将连接产物经培养挑选阳性克隆子经测序鉴定正确后即得。

3.根据权利要求2所述的表达载体，其特征在于，步骤A引物设计为：F1引物5′端设有EcoRI酶切位点，R1引物5′端设有Not I酶切位点，且：F1：

5′-GGAATTCATGTCCGTTTTGAGATACGACGAC-3′，R1：5′-CCGCTCGAG

TTATCTGATCAATGGGGAAGTA-3′。

4.根据权利要求2所述的表达载体，其特征在于，步骤B的具体操作为：以gE基因片段为模板进行PCR扩增，反应后的PCR产物经胶回收试剂盒回收；将回收片段和pGAPZαA经限制性内切酶EcoR I和Not I进行双酶切完全后，胶回收酶切片段；将回收后gE片段与pGAPZαA混合经T4连接酶16℃连接过夜；再将连接产物转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中，涂布于含有Zeocin抗性的平板上，37℃培养过夜；挑取阳性克隆子进行菌落PCR，酶切鉴定后测序分析是否正确表达。

5.根据权利要求2～4任一项所述的表达载体，其特征在于：所述gE扩增通过引物扩增gE基因全序列后克隆至大肠杆菌质粒，再以质粒-gE为模板进行PCR扩增。

6.重组酵母株，其特征在于：所述酵母株为表达如SEQ ID NO：1所示的水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E的基因全序列的酵母株X33。

7.根据权利要求6所述的重组酵母株，其特征在于：所述的酵母株为含有如权利要求1～5任一所述的水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E基因表达载体的酵母株X33。

8.重组酵母株，其特征在于，所述酵母株通过如下方法筛选而得：将权利要求1～5任一所述的重组表达载体pGAPZαA-gE转化至大肠杆菌，将菌液涂布至含有100ug/mL Zeocin的LB平板培养至单菌落后培养并提取质粒，再经线性化单酶切、回收后电转化，至酵母感受态细胞中后经恒温摇床内培养；再将菌液涂布于含有100ug/mL Zeocin的YPD平板培养至单菌落长出；挑选单菌落经YPD液体培养基避光摇瓶培养再经测序检测，测序后鉴定序列正确即得经鉴定的重组酵母菌株。

9.根据权利要求8所述的重组酵母株，其特征在于：所述酵母为毕赤酵母菌细胞X33。

10.权利要求8或9所述的重组酵母株的应用，其特征在于：将所述酵母株用于表达水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E基因。