[发明专利]一种快速检测Q烟粉虱体内共生菌Cardinium的引物及方法

说明书

本发明涉及一种快速检测Q烟粉虱体内共生菌Cardinium的引物及方法。所述方法步骤如下：(1)提取Q烟粉虱基因组DNA；(2)以Q烟粉虱基因组DNA为模板对其进行PCR扩增；(3)对步骤(2)制得的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。本发明所述的检测方法，为检测Q烟粉虱体内共生菌Cardinium提供了简便稳定的分子标记，为今后探究Q烟粉虱与共生菌Cardinium的互作机制奠定了基础。

技术领域

本发明涉及一种基于常规PCR技术快速检测烟粉虱体内Cardinium共生菌的引物及方法，属于农业生物技术领域。

背景技术

烟粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)是一种世界性农业害虫，也是科技界有史以来唯一冠以“超级害虫”称谓的昆虫。烟粉虱既通过吸取植物汁液直接为害宿主植物，又可以分泌蜜露而滋生煤污菌对宿主植物造成间接危害；更重要的是多数刺吸式昆虫都是植物病毒传播媒介，传播植物病毒并引发植物病毒病是烟粉虱对农作物的最主要危害方式。烟粉虱是一个包含多个隐种的复合种，其中B和Q隐种是入侵性最强、分布最广的两种。2003年在云南昆明一品红植株上首次发现Q烟粉虱入侵中国后，在其他多数省份也陆续发现了Q烟粉虱。目前，Q烟粉虱已在全国范围内取代了B烟粉虱成为作物上烟粉虱优势种。

共生菌Cardinium是Q烟粉虱体内一种重要次生内共生菌，属于拟杆菌门(Bacteroidetes)鞘脂杆菌纲(Sphingobacteria)，屈挠杆菌科(Flexibacteraceae)。Cardinium于2004年在恩蚜小蜂属(Encarsia)寄生蜂中首次报道，目前已发现在蛛形纲以及昆虫纲的膜翅目和半翅目等类群中广泛存在。Cardinium对寄主的调控功能基本与Wolbachia一致，能够引起宿主的雌性化，诱导产雌孤雌生殖和诱导胞质不亲和等生殖异常现象。此外，研究还表明Cardinium能提高种群的繁殖率进而提高其适合度。

共生菌Cardinium的传播方式主要是通过雌虫产卵垂直传给下一代。目前使用传统的Cardinium检测方法检测已知感染Cardinium烟粉虱，即提取单头烟粉虱DNA，以DNA为模板，利用Cardinium的16S rRNA基因进行常规PCR扩增(尹祥杰，孙秀新，MuhammadZAhmed，任顺祥，邱宝利.2015.南方部分地区烟粉虱及其寄生蜂内共生菌Cardinium的检测及其系统发育关系，应用昆虫学报，52(4)：1014-1022.)，发现在已知感染Cardinium的烟粉虱种群中Cardinium检测率仅有30％左右。使用现有常用引物(Card-F：5’-ACGGGAGGCAGCAGTA-3’；Card-R：5’-CCGCAGGGATTGTTTT-3’)检测已确定感染Cardinium烟粉虱种群发现，该引物对烟粉虱体内Cardinium具有非特异性扩增现象。另外，虽然利用荧光定量PCR与常规PCR相结合的方法能够在烟粉虱体内全部检出Cardinium(张文平，刘佰明，张珊，万方浩，褚栋.2015.基于EPG技术的烟粉虱两个品系取食行为的比较，中国农业科学，2016，49(13)：2544-2552.)，但操作步骤繁琐且耗时耗力。

综上所述，目前对Q烟粉虱体内共生菌Cardinium的检测存在着检出率低或者操作步骤繁琐且浪费人力、物力、财力的不足。因此，目前急需一种快速高效检测Q烟粉虱体内Cardinium共生菌的引物及方法。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种快速有效的检测Q烟粉虱体内共生菌Cardinium的引物及方法。

本发明技术方案如下：

一种快速检测Q烟粉虱体内共生菌Cardinium的基因片段，核苷酸序列如SEQ IDNO.3所示。

一种快速检测Q烟粉虱体内共生菌Cardinium的引物，所述引物为一对，上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物核苷酸序列如SEQ NO.2所示。