[发明专利]抗MSH6蛋白单克隆抗体及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及可特异结合MSH6蛋白的单克隆抗体UMAB258、产生所述单克隆抗体的细胞株及应用该抗体用于诊断的方法和用途。

背景技术

MSH6(human muts honolog)基因是人类错配修复系统(mismatch repair MMR)的主要成员之一,1995年首次发现MSH6参与构成错配结合因子。序列分析证明,MSH6是MutS同源物家族的成员。1996年,确定了MSH6基因的整个编码区。1997年首次报道了人类hMSH6基因的突变。研究发现,该基因的突变与结肠癌、肝癌、子宫内膜癌、胃癌、肺癌、卵巢癌、泌尿道上皮肿瘤等的发生密切相关。

子宫内膜癌的高发病率与MSH 6的突变密切相关。在有多个成员患有子宫内膜癌的家庭发现了MSH 6突变。Goodfellow对441例子宫内膜癌患者研究发现100例患者有MSH6基因缺失(23％)；和其他MMR基因比较,MSH 6基因突变的个体更易发生子宫内膜癌、卵巢癌等恶性肿瘤。因此,在女性筛检时进行MSH 6的筛检可能有很大意义。临床上常用免疫组织化学(IHC)病理实验检测肿瘤细胞中蛋白的表达状况，然而IHC实验的核心为特异性结合蛋白的单克隆抗体，其性能的优劣直接决定着整个检测的灵敏度和特异性。因此，研制出一种结合特异性较高的针对MSH6蛋白的单克隆抗体对IHC检测MSH6表达水平具有重要的意义。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种结合特异性较高的MSH6蛋白的单克隆抗体，及其在制备用于检测MSH6蛋白的免疫检测工具中的应用。

本发明提供了一种杂交瘤细胞株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称为CGMCC)，保藏日期为2017年4月6日，保藏编号为CGMCC No.13822。

本发明还提供了一种特异性结合MSH6蛋白的单克隆抗体UMAB258，由上述杂交瘤细胞株产生。

本发明所述单克隆抗体的制备方法如下：

(1)重组表达载体的构建：根据MSH6ORF核苷酸序列(MSH6ORF核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，4080bp；MSH6氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示)

设计引物PCR扩增MSH6ORF第1bp位到第840bp位序列，基因两侧分别引入限制性内切酶位点SgfI和MluI，插入表达载体pET23a-N-His，构建MSH6氨基酸序列第1位到第280位的重组表达质粒pET23a-rMSH6；上游扩增引物序列，SEQ ID NO.3:CACGCGATCGCATGTCGCGACAGAGCACCC下游扩增引物序列SEQ ID NO.4:ACCGACGCGT CTA ACTGCTTATTTCATCACTG

(2)MSH6重组蛋白的表达与纯化：将MSH6重组表达质粒转化E.Coli细胞，裂解离心获得上清，镍柱亲和层析柱纯化，获得纯化的MSH6重组蛋白；

(3)单克隆抗体的筛选与制备：采用上述纯化的MSH6重组蛋白免疫Balb/c小鼠，取小鼠脾脏细胞与SP2/0细胞进行融合，有限稀释法获得单克隆，ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞，获得能分泌抗MSH6特异性抗体的杂交瘤细胞株，命名为UMAB258，亚型鉴定为IgG1；通过无血清培养基制备抗体，通过亲和层析柱纯化获得MSH6单克隆抗体UMAB258。分别通过Western Blot、免疫组化实验验证该单克隆抗体的灵敏度和特异性。

本发明还提供了单克隆抗体UMAB258在制备用于检测MSH6蛋白的免疫检测工具中的应用。

具体地，所述免疫检测工具为试剂盒、芯片或试纸。

在具体的实施例中，本发明提供了一种免疫组化检测试剂盒，包括上述单克隆抗体UMAB258，可检测组织细胞中MSH6的表达状况。

本发明还提供了上述单克隆抗体在制备用于标记肿瘤的试剂盒中的应用。其中所述肿瘤具体是指肿瘤细胞的增殖与MSH6的表达密切相关的肿瘤，包括但不限于结肠癌、肝癌、子宫内膜癌、胃癌、肺癌、卵巢癌、泌尿道上皮肿瘤。