[发明专利]净化二苯乙烯类药物的免疫亲和搅拌棒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及兽药残留检测技术领域，具体涉及一种净化二苯乙烯类药物的免疫亲和搅拌棒及其制备方法。

背景技术

二苯乙烯类药物为一类典型的人工合成的非甾体类雌激素，用于动物的激素缺乏治疗和节育，20世纪60年代曾作为官方批准使用的促生长添加剂，应用于畜牧业生产中。但随后对其进行药物毒理研究，表明此类药物可诱导癌症的发生。尤其是动物源性食品中二苯乙烯类雌激素的残留，可通过食物链进入人体，并对人体的内分泌系统的正常功能产生干扰，甚至诱发乳腺癌和前列腺癌和白血病等疾病(Hu et al.2013)。同时，在环境水样中也发现了二苯乙烯类药物的残留情况。在20世纪末，各国陆续公布法令，禁止将二苯乙烯类雌激素应用畜牧业生产中。因此，对于此类激素的药物残留检测方法的探索意义重大。在残留分析方法中，样品的前处理技术是整个过程的关键及瓶颈。传统的前处理技术，药物富集倍数低，有毒有害的有机试剂的使用量大，对操作者和环境都有危害。而且操作步骤繁琐，费时费力。因此，开发高效、简单、有机溶剂用量小的绿色前处理技术成为了分析化学发展的重要课题。

发明内容

本发明提供了一种净化二苯乙烯类药物的免疫亲和搅拌棒的制备方法，包括如下步骤：S101(不锈钢棒的表面处理)：将不锈钢棒或不锈钢管的一端浸入浓盐酸溶液中刻蚀，然后用去离子水冲洗，烘干后冷却至室温；其中，浸入的长度为1.0cm～3.0cm，刻蚀的时间为25min～30min，烘干为130℃烘干1h；S102(键合硅胶颗粒)：将冷却后且刻蚀过的不锈钢棒的一端蘸取硅酸钾溶液，然后粘附5μm的硅胶颗粒，使不锈钢表层被硅胶颗粒均匀覆盖；再将不锈钢棒粘附硅胶部分置于浓硝酸的瓶口烟熏15s，然后在室温下干燥15h；其中，硅酸钾溶液的质量分数为30％；S103(脱水固定)：去除经过S102处理后的不锈钢棒中的水分；S104(硅烷化处理)：将经过S103处理后的不锈钢棒的附有硅胶的一端浸入含APTES(氨丙基三乙氧基硅烷)的乙醇水溶液中，室温摇晃过夜；其中，含APTES的乙醇水溶液中，乙醇、超纯水和APTES的体积比为90:5:5，摇晃的速率为60r/min；S105(氨基固定)：将经过S104处理后的不锈钢棒依次采用无水乙醇、超纯水和无水乙醇冲洗，然后放入连接有氮气罐的真空抽滤瓶中，抽出真空抽滤瓶中空气并充满氮气，并将真空抽滤瓶的下半部分浸入80℃的液体石蜡中，恒温保持10～15h；S106(活化、偶联反应)：将经过S105处理后的不锈钢棒进行活化和偶联反应；S107(不锈钢棒去活化)：将经过S106处理后的不锈钢棒浸泡于乙醇胺水溶液中，室温摇晃过夜；其中，乙醇胺水溶液中乙醇胺的浓度为0.2mg/mL，乙醇胺水溶液的pH值为8.32，摇晃的速率为60r/min；S108(共价键固定)：将经过S107处理后的不锈钢棒浸入0.2mg/mL的NaCNBH₃溶液中，4℃保温48h，得到免疫亲和棒。

需要说明的是，原材料不仅可以采用不锈钢棒，还可以选用不锈钢管和表面光滑的条形不锈钢体，其也应在本发明的保护范围之内；不锈钢棒具体为长10cm，直径2mm，当不锈钢棒以不锈钢管或表面光滑的条形不锈钢体代替时，不锈钢管为长10cm，内径1cm，壁厚1mm。S102中，待不锈钢棒冷却后将刻蚀过的一端蘸取浓度为30％的硅酸钾溶液后在5μm的硅胶颗粒上轻轻匀速滚动粘附，使不锈钢表层被硅胶颗粒均匀覆盖；如果选取的是不锈钢管，不锈钢管外表面处理同上，同时将硅胶颗粒充盈内管腔，轻轻匀速转动不锈钢管，使硅胶颗粒均匀接触管内壁。

在本发明的进一步实施方式中，S106中，活化和偶联反应包括：将经过S105处理后的不锈钢棒浸入到pH值为8.5的活化剂中，5h后用超纯水冲洗，然后浸入到含单克隆抗体的PBS液中，室温摇晃过夜；其中，含单克隆抗体的PBS溶液中，单克隆抗体的浓度为0.5mg/mL，摇晃的速率为60r/min。

在本发明的进一步实施方式中，S106中，活化剂包括：1112μL质量分数为25％的戊二醛溶液、10mL 0.1mol/L的碳酸钠溶液和50mmol/L氰基硼氢化钠。

在本发明的进一步实施方式中，S106中，活化和偶联反应包括：将经过S105处理后的不锈钢棒浸入到经EDC/NHS活化后的抗体溶液中，室温摇晃过夜；其中，含单克隆抗体的PBS溶液中，单克隆抗体的浓度为0.5mg/mL，摇晃的速率为60r/min。