[发明专利]一种检测血清TNFSF13β的方法

说明书

本发明公开了一种检测方法，所述方法可以检测血清TNFSF13β或其表达的蛋白。本发明进一步公开了所述方法在糖尿病胰腺癌患者早期诊断中的应用。本发明发现采用胶乳颗粒增强比浊法可以精准、灵敏检测血清TNFSF13β或其表达的蛋白，此方法可以成为血糖升高病人的早期胰腺癌发现新方法、常规方法，具有深远的临床意义和推广价值。

技术领域

本发明涉及生物医药领域,具体涉及一种检测血清TNFSF13β的方法及所述方法在糖尿病胰腺癌患者早期诊断中的应用。

背景技术

TNF superfamily member 13（TNFSF13）是TNF-α超家族成员。TNFSF13又叫增殖诱导配体（a proliferation—inducing ligand，APRIL），1998年由Hahne等首先发现并克隆成功，属于Ⅱ型跨膜蛋白，有膜结合型及可溶性型两种活性形式。TNFSF13具有α和β两种剪接体。其中，α是全长形式，而β剪接体缺少了一个48bp的外显子。

胰腺癌是一种低发病率、高死亡率、生存时间短的疾病。世界范围内，胰腺癌总体发病率不高，在北美洲约为6-11/10 万，非洲、印度更是低于1.5/10 万，我国统计显示为5.1/10 万。然而，胰腺癌死亡率极高，在美国居于癌症死亡率第四位，我国为第五位。同时，近30年来，胰腺癌发病率在国内外均呈上升趋势。胰腺癌发现时约80%为晚期，进展迅速，中位生存时间仅为诊断后的4-6 个月，1年生存率、3年生存率约为8%、5%；小于3%的人存活时间超过5年。

胰腺癌是“癌中之王”，起病隐匿，诊断时多为中晚期，诊断后6-8个月死亡。早期胰腺癌可手术治愈，但目前的CT等筛查方法难以大规模推广，探索一种早期胰腺癌发现的新方法迫在眉睫。已经证实，胰腺癌患者血糖常升高，但血糖升高患者中，胰腺癌患者比例较低。对所有血糖升高患者进行CT等检测，成本巨大。

目前，体液标志蛋白的检测方法主要采用免疫学方法，以酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked ImmunosorbentAssay，ELISA）、放射免疫测定（Radioimmunoassay，RIA）和胶体金层析法（俗称“金标”）这几种方法为主。ELISA方法虽然在临床上使用了近二十年，但它依然存在一些致命缺点，定量准确性差、操作时间长、自动化程度低，一般只能用于定性检测。RIA灵敏度高，但不稳定，重复性比ELISA差，而且存在放射性污染的危险。金标方法虽然稳定性较好，但灵敏度较低，只能定性，不能定量。特别是

重复性差这一缺点限制了这些检测技术在临床上的应用，尤其不适合用于需要通过准确定量来帮助对疾病进行诊断的体液标志蛋白的定量检测。因此，寻找更加稳定、准确的血浆蛋白定量检测方法一直是国际上近十年来的研究热点。

胶乳颗粒增强比浊法（particle-enhanced turbidimetric immunoassay,PETIA）是近年来出现的一种较为稳定、准确的体液蛋白均相免疫比浊检测方法。

PETIA法大体分为两种。一种是散射比浊检测法；另一种是透射比浊检测法。这两种方法的基本原理非常相似，都是在高分子胶乳微球的表面交联单克隆抗体，当交联有抗体的微球与抗原结合后，在短时间内会迅速聚集在一起，改变了反应液的散光性能或透光性能。而且，反应液散光性能或透光性能（即吸光度）的改变与被测抗原的浓度有较强的相关性,在一定范围内可以反映被测抗原的浓度。PETIA检测方法是在均相反应体系中进行抗原、抗体反应及结果的测定。抗原、抗体反应后，直接测定反应液的吸光度值，省却了ELISA法反复孵育和洗板等烦琐操作步骤，几分钟就能获得结果，省时省力。此外，纳米免疫比浊法操作步骤的简化也相应地避免了许多人为操作因素和试剂、环境等外界因素的干扰，稳定性和重复性都较好，能较真实地反映被测物质的含量。免疫比浊法的灵敏度虽然比ELISA法差一些，但足于检测到健康人血浆中许多标志蛋白的下限值，可完全满足临床检测要求。