[发明专利]一种同时检测NUDT15和UGT1A1基因多位点突变的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测领域，特别一种同时检测NUDT15和UGT1A1基因多位点突变的试剂盒。

背景技术

骨髓抑制，是化疗过程中常见的毒性反应，使周围血细胞数量减少,血细胞由多种成分组成,每一种成分都对人体起着不可缺少的作用,任何一种成分的减少都使机体产生相应的副反应。严重的威胁着患者的生命安全和生存质量。巯嘌呤类药物(如常见的咪唑硫嘌呤及6-巯基嘌呤)，广泛地应用在自身免疫疾病，器官移植及炎症疾病上。伊立替康是广谱的抗肿瘤药，现已用于胃癌、结直肠癌、肺癌等实体肿瘤的治疗。

此两种化疗药物均可引起骨髓抑制。但出现骨髓抑制的概率及严重程度，在不同的个体上差异很大。国外试验研究发现，含有UGT1A1*28及UGT1A1*6的纯合子或杂合子基因型个体应用伊立替康后，出现骨髓抑制和Ⅲ～Ⅳ度腹泻的风险更大。在在治疗白血病和克罗恩病中，突变型的NUDT15的患者在使用巯嘌呤类药物后出现的骨髓抑制比野生型患者高出88倍。故而使用巯基嘌呤类药物及伊立替康前进行基因检测很有必要，能够更加安全有效地指导用药。目前，在市面上，没有能够同时检测UGT1A1和NUDT15的产品，因此发明一种可以同时检测两种基因多态性的试剂盒是十分有必要的。

发明内容

本发明的目的在于公开了一种同时检测NUDT15和UGT1A1基因多位点突变的试剂盒。

本发明所采取的技术方案是：一种可同时检测基因多位点突变的试剂盒，试剂盒含有检测NUDT15基因多态性和UGT1A1基因多态性的引物。

优选的，UGT1A1基因多态性位点为UGT1A1*28、UGT1A1*6。

优选的，检测UGT1A1*28基因位点的引物是：

正向引物：5’-AACATTAACTTGGTGTATCGATTGGT-3’(SEQ ID NO：1)；

反向引物：5’-AGCAGGCCCAGGACAAGT-3’(SEQ ID NO：2)；

野生型探针序列是：TGCCATATATATATATATAAGTAGGAA(SEQ ID NO：3)；

突变体探针序列是：TGCCATATATATATATATATAAGTAGGAA(SEQ ID NO：4)。

优选的，检测UGT1A1*6基因位点的引物是：

正向引物：5’-CAGTCAAACATTAACTTGGTGTATCG-3’(SEQ ID NO：5)；

反向引物：5’-CTTTGCTCCTGCCAGAGGTTCG-3’(SEQ ID NO：6)；

野生型探针序列是：TAGCACCTGACGCCTCGTTG(SEQ ID NO：7)；

突变体探针序列是：TCTTTCACATCCTCCCTTTGGG(SEQ ID NO：8)。

优选的，检测NUDT15基因的引物是：

正向引物：5’-CCACCAGATGGTTCAGATCTTG-3’(SEQ ID NO：9)；

反向引物：5’-TGGGTTCCTTGGGAAGAACTAC-3’(SEQ ID NO：10)；

野生型探针序列是：CAACGCAGTCCCT(SEQ ID NO：11)；

突变体探针序列是：CAACACAGTCCCCT(SEQ ID NO：12)。

优选的，野生型探针有发光基团和猝灭基团；其中发光基团为FAM，猝灭基团为MGB。

优选的，突变体探针有发光基团和猝灭基团；其中发光基团为VIC，猝灭基团为MGB。

试剂盒在制备治疗癌症药物中的应用。

本发明的有益效果是：该试剂盒可以同时基因多态性位点NUDT15、UGT1A1*28、UGT1A1*6，操作简单方便，克服了不同基因位点间的下相互之间的干扰问题，并且这种试剂盒具有检测灵敏度高、效果好的优点。

具体实施方式

实施例1：

引物及探针的设计：

设计UGT1A1*6、UGT1A1*28、NUDT15基因多位点的特异性引物对与探针，具体如下：

实施例2：

用实施例1的引物，按以下体系配制反应液，并检测人外周抗凝血提取的DNA，再用直接测序法进行验证。

反应液的配制：