[发明专利]一种基于SPEXIN的结直肠癌辅助诊断和/或预后判断试剂盒及应用

说明书

技术领域

本发明属于肿瘤分子生物学技术领域，具体涉及一种基于SPEXIN的结直肠癌辅助诊断和/或预后判断试剂盒及应用。

背景技术

结直肠癌（colorectal cancer，CRC）是严重威胁人类生命健康的恶性肿瘤之一。世界流行病学调查表明，结直肠癌在各类恶性肿瘤中的发病率居第3位。随着经济发展和人民生活水平的提高，生活方式和饮食结构的改变，在我国其发病率在各种居恶性肿瘤仅次于肺癌及乳腺癌居第3位，死亡率居第4位。而且据预测，我国结直肠癌的发病率和死亡率在今后相当长一段时间内将呈稳步上升趋势，成为我国最常见、高发病率的恶性肿瘤之一，已经成为严重威胁人民的健康。

结直肠癌的发生与饮食环境遗传等密切相关，是多种因素共同作用的结果，结肠癌的防治研究已不断引起人们的重视。由于结直肠癌临床前期无症状，且持续时间较长，因此对结直肠癌的早期诊断和筛查并及时进行治疗，有助于降低结直肠癌的发病率及死亡率。肿瘤分子标志物是指肿瘤细胞在癌变过程中由于基因表达的增加或降低导致其含量改变的一些蛋白或生物活性物质，可用于肿瘤诊断，检测肿瘤过程以及患者愈后评定，它对肿瘤的临床治疗产生了很大的影响。所以寻找较高灵敏性和特异性的肿瘤分子标志物，对结直肠癌的诊断是十分有必要的。通过寻找新的结直肠癌标志基因，对预测结直肠癌的发生发展治疗效果有一定的临床指导意义。目前，基因诊断技术的建立和发展为结直肠癌的早期辅助诊断和预后判断提供了途径。

SPEXIN蛋白最早是由Mirabeau团队基于隐马尔可夫模型（HMM）的生物信息学搜索策略首次鉴定发现。人SPEXIN基因（Ch12, orf39；～17,333 bp）位于染色体12p12.1。SPEXIN 基因和蛋白广泛在人类和啮齿类动物的中枢神经系统和外周组织都有分布。SPEXIN蛋白参与机体能量代谢、心血管、食欲等生理和病理功能的调节。然而，SPEXIN基因和/或蛋白对结直肠癌的作用迄今尚未见报道。

目前临床上常用的用于结直肠癌早期诊断的标志物在特异性和灵敏度方面尚存在一些不足。随着对癌症发生发展过程中分析信号的阐明，新的肿瘤标志物可能会出现。分子生物学的不断发展以及基因工程技术的不断进步，寻找和利用新的且敏感度高的标志基因，可有效地进行分子水平的检测和诊断，进而为这些疾病的早期诊治和预防提供有利条件。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于SPEXIN的结直肠癌辅助诊断和/或预后判断试剂盒，该试剂盒能特异检测出SPEXIN基因的表达有无下调，从而作为结直肠癌的诊断依据。该试剂盒检测灵敏度高、特异性强。

本发明的目的通过以下技术方案实现：一种基于SPEXIN的结直肠癌辅助诊断和/或预后判断试剂盒，所述试剂盒包括引物对Ⅰ和引物对Ⅱ；所述引物对Ⅰ的正向序列如SEQ ID NO：1 所示（cacagagcct cgcctttgc），反向序列如SEQ ID NO：2所示（ccaccatcac gccctgg ）；所述引物对Ⅱ的正向序列如SEQ ID NO：3所示（tccgcagaga ctgttggaga），反向序列如SEQ ID NO：4所示（gttgctgcct ccggaatagt）。

所述的基于SPEXIN的结直肠癌辅助诊断和/或预后判断试剂盒，还包括试剂Ⅰ、试剂Ⅱ和溶液组，溶液组包括溶液a-i, 试剂Ⅰ、试剂Ⅱ及溶液a-i的组成如下：

。

所述的基于SPEXIN的结直肠癌辅助诊断和/或预后判断试剂盒的应用，其特征在于包含如下操作步骤：

（1）从受试者的血液或结直肠组织提取总RNA；

（2）检测样本和对照中SPEXIN的表达水平；

（3）分别对样本和对照中SPEXIN的水平进行分析评估。

所述步骤（1）中结直肠组织为结直肠癌组织或癌旁组织。

所述步骤（2）为：将步骤（1）提取的总RNA反转录成的cDNA作为模板，以引物对Ⅰ为模板的检测结果作为内参基因表达量、以引物对Ⅱ为模板时的检测结果作为目的基因SPEXIN表达量。

所述步骤（2）中SPEXIN的表达水平是指SPEXIN基因、SPEXIN多肽、SPEXIN蛋白质、SPEXIN多肽的结构衍生物或SPEXIN蛋白的功能类似物的水平。