[发明专利]CYP2C19*3基因多态性快速检测的引物、分子信标、试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及一种CYP2C19*3基因多态性快速检测的引物、分子信标、试剂盒及其检测方法。

背景技术

核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism，SNP)主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。在人类基因组中SNP广泛存在，平均每1000个碱基对就会存在1个SNP。这些遗传变异是造成人类多样性的基础，它们中的一些与许多遗传性疾病的易感性及个体间药物反应的差异有密切联系。因此，SNP在分析诊断、临床检验、法医学、病原检测、遗传疾病和新药研发等方面具有重要的应用价值；

CYP2C19是细胞色素450酶(CYP450)家族中的重要成员，参与多种国内外权威指南推荐的一线用药的代谢(氯吡格雷、质子泵抑制剂、西酞普兰、艾司西酞普兰、舍曲林、伏立康唑、阿米替林、地西泮等)。该基因的单核苷酸多态性是造成这些药物具有显著个体代谢差异的重要因素，其中CYP2C19*3是该基因最常见的SNP之一。CYP2C19*3(636G>A，rs4986893) 的出现导致CYP2C19编码的蛋白质合成提前终止，使该酶丧失活性。在人群中该SNP位点共存在三种不同的基因型，即突变纯合型(*3/*3)、突变杂合型(*1/*3)及野生纯合型(*1/*1，不存在CYP2C19*3)。突变纯合型患者对药物的代谢属于慢代谢型，突变杂合型患者为中等代谢型，而野生纯合型患者则属于正常代谢型；

在亚洲人群中，*3发生的频率占5-10％。因此通过患者基因型的确定判定患者的药物代谢类型，可以帮助医生选择合适的药物及合理的药物剂量，在提高药物使用有效性的同时还可降低毒副作用；

目前，市面上可用于CYP2C19*3检测的方法有基因芯片法、直接测序法、限制性片段长度多态性(Restriction Fragment Length Polymorphism，RFLP)、连接酶检测反应(Ligase Detection Reaction，LDR)、质谱检测法(MassARRAY、MALDI-TOFMS)、改进的连接酶检测反应(iMLDR)、SNaPShot检测法、高分辨率熔解曲线(High Resolution melting，HRM)及Taqman 荧光探针法等。以上方法具有以下一种或多种缺点，如操作繁琐，耗时，灵敏度低，结果不稳定，易出现假阳性，具有位点选择性，需要专业知识、技能、场地及昂贵仪器等缺陷。而现在广泛采用的Taqman探针法或需要提纯的DNA为样本，或需要抽取血液，或两者皆需。因此，难以满足临床疾病的快速诊断，增加了患者疾病治疗的风险。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种操作简单、避免污染且检测快速的CYP2C19*3基因多态性快速检测所涉及的引物、分子信标、试剂盒及其检测方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：CYP2C19*3基因多态性快速检测的试剂盒，

包括PCR反应液、特异性引物和分子信标；PCR反应液的原料及终浓度为，

DNA聚合酶0.05-0.12U/μL；dNTPs 0.2mM；5X反应缓冲液1X；MgCl2 1.5-3.5mM；十二烷基硫酸钠0.0005-0.015％(w/v)；聚乙二醇辛基苯基醚0.001-0.03％ (w/v)；

特异性引物包括正向引物和反向引物，且其终浓度均为0.2-0.5μM；

分子信标包括突变型探针和野生型探针，且其终浓度均为0.4-0.6μM；

其用于检测细胞样品。