[发明专利]地衣芽孢杆菌HLS及其结球方法与应用

说明书

本发明公开了一种地衣芽孢杆菌HLS及其结球方法与应用，所述地衣芽孢杆菌HLS的分类命名为地衣芽孢杆菌(Bacillus Licheniformis)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCC NO.14106，保藏日期：2017年5月8日，其结球方法如下：一、将地衣芽孢杆菌HLS接种至100mL的LB液体培养基中，37℃，170rpm，过夜培养；二、将培养好的液体菌以1％的接种量接种至100mL含有0.4～0.9mmol/L Cu²⁺的LB液体培养基中，37℃，170rpm过夜培养，得到地衣芽孢杆菌HLS菌球。本发明筛选得到的地衣芽孢杆菌HLS在一定的培养条件下能够形成菌球，该菌球可以重复使用用于对染料脱色，因此省略了制备固定化细胞的过程。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，涉及一株地衣芽孢杆菌(Bacillus Licheniformis)HLS及其结球方法与应用。

背景技术

在纺织、治金和日化等行业生产中需要用到大量染料，大多染料的结构较为复杂，稳定性较高，可降解性差，在生产过程中对环境的污染严重，染料废液的处理有待研究。传统的物理或化学处理方法在降解过程中会造成二次污染，采用生物学方法处理染料是较为环保的方式，利用酶制剂处理染料废水不仅效率高，而且操作简单。漆酶是在染料脱色方面应用最为广泛的一种酶制剂。

地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)为芽孢杆菌属的革兰氏阳性菌，对外界有害因子抵抗力强，在极端环境中细胞质高度浓缩脱水形成芽孢，能够耐受高温、强酸和强碱等环境。地衣芽孢杆菌的芽孢蛋白具有漆酶的活性，漆酶能够催化许多芳香族化合物并有广泛的作用底物，可以降解环境中的有毒有害物质，去除染料及土壤中的杂酚油类物质，对于环境污染物的消除起着很大的作用。但天然酶稳定性差、易失活及不能重复使用，固定化酶技术克服了游离酶的不足，提高了酶的稳定性，降低了成本。目前关于地衣芽孢杆菌可以结球的报道很少。通过研究小球的特性及对不同类型染料的脱色效果，可以进一步推动芽孢杆菌在环境治理方面的应用。

发明内容

本发明的目的是提供一株地衣芽孢杆菌HLS及其结球方法与应用，该地衣芽孢杆菌HLS在培养过程中产生了一种粘性小球，该小球能够使染料脱色，并可以重复使用，天然形成了固定化酶。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

地衣芽孢杆菌HLS，分类命名为地衣芽孢杆菌(Bacillus Licheniformis)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国微生物研究所，保藏编号：CGMCC NO.14106，保藏日期：2017年5月8日。

本发明的地衣芽孢杆菌HLS细胞大小为(0.5～0.8μm)×(1.5～2.5μm)，菌落乳白色、呈圆形，表面干燥光滑，培养3天后的菌落产生红色素。

本发明的地衣芽孢杆菌HLS的V-P试验呈阳性，硝酸盐还原试验呈阳性，硝酸盐产气试验呈阳性。地衣芽孢杆菌HLS可利用麦芽糖、甘露糖、果糖、葡萄糖、甘露醇、阿拉伯糖和蔗糖，地衣芽孢杆菌HLS可水解淀粉和明胶，地衣芽孢杆菌HLS为发酵型。

本发明的地衣芽孢杆菌HLS可在LB培养基上生长，最适生长温度为37℃，最适生长pH为7.0。

本发明的地衣芽孢杆菌HLS的16S rDNA序列只与地衣芽孢杆菌同源性为99％，结合菌体形态和生理生化特性，鉴定该菌株HLS为地衣芽孢杆菌(Bacillus Licheniformis)。

上述地衣芽孢杆菌HLS的结球方法，包括如下步骤：

一、将地衣芽孢杆菌HLS接种至100mL的LB液体培养基中，37℃，170rpm，过夜培养；