[发明专利]一种检测二乙烯三胺五乙酸及其螯合物的胶体金试纸及其制备和检测方法

说明书

本发明涉及一种检测二乙烯三胺五乙酸及其螯合物的胶体金试纸及其制备和检测方法；所述胶体金试纸包括反应膜、样本垫、结合物释放垫、吸水垫和背衬；所述反应膜上具有包被二乙烯三胺五乙酸‑载体蛋白偶联物的测试区和包被羊抗鼠IgG的质控区，所述结合物释放垫包被二乙烯三胺五乙酸单克隆抗体‑胶体金标记物；检测时，将样品滴入试剂卡孔内，当二乙烯三胺五乙酸及其螯合物在样品中浓度低时，胶体金抗体在层析过程中会被固定在反应膜上的二乙烯三胺五乙酸偶联物结合，在测试区质控区内会出现各一条红色条带；浓度高时，则反之；本发明能准确、快速检测鸡肉、猪肉、尿液、蜂蜜等动物源性食品、洗涤剂及水环境中二乙烯三胺五乙酸及其螯合物的残留含量。

技术领域

本发明涉及一种胶体金试纸，具体的说是一种检测二乙烯三胺五乙酸及其螯合物的胶体金试纸及其制备和检测方法。

背景技术

二乙烯三胺五乙酸(DTPA)是一种优良的氨羧络合剂，螯合性强，它与大多数阳离子形成的整合物比乙二胺四乙酸的相应螯合物要稳定。作为高效螯合剂，应用于腈纶生产中颜色抑制剂、造纸行业、软水剂、纺织助剂、螯合滴定剂、彩色照相和食品工业中等。同时在医疗、稀土元素分离及农业生产中也有着广泛的应用。

二乙烯三胺五乙酸也用作金属毒物解毒剂，对金属毒物的促排效果常优于EDTA，但其副作用通常也更大一些，特别是对体内必需微量元素的加速排除，有必要予以观察。肌注二乙烯三胺五乙酸，用药一疗程后，血清Zn约下降一半，Fe下降15%。当DTPA浓度为治疗量的6-30倍时，可对小鼠的肝、肾产生暂时性的有毒效应，这可能是引起蛋白质从细胞膜渗出之故。并且有证据表明DTPA可诱发蚕豆染色体畸变，所以DTPA对人类可能是危险的。高浓度DTPA使人淋巴细胞姐妹染色单体互换（SCE）量增加及染色体的畸变如断片、环、双着丝点。所以需加强对二乙烯三胺五乙酸的检测。

目前，二乙烯三胺五乙酸及其螯合物的检测方法有气相色谱法、高效液相色谱法(HPLC)。但这些方法检测费时费力且成本高，与其它检测系统相比，一次检测样品量少，检测时间长，不适合现场快速检测，仅作为少数实验室的确证方法，满足不了环境和农产品检测快速简便的需要。

而基于二乙烯三胺五乙酸特异性抗体的免疫检测方法为其检测提供了一种新的策略。免疫法目前越来越受到重视，因其检测限低，单个样品检测成本低（如ELISA法），尤其适合应用于大批样品的检测，尤其是免疫层析法，检测速度快，灵敏度高，与HPLC、GC-MS检测有较高一致性，而且非常适合活体动物的检测。而且成本低，无需大型仪器，而且可以直接对尿液、饲料、洗涤剂、水样等样品进行检测，适用于现场检测。但是，目前还没有检测二乙烯三胺五乙酸及其螯合物的商品化的试剂盒和试纸条。因此，研究和建立具有我国自主知识产权的二乙烯三胺五乙酸及其螯合物免疫学检测方法，对提高我国环境和农产品二乙烯三胺五乙酸及其螯合物控制和监测水平，保障环境及农产品质量安全和消费者的健康具有重要意义。

发明内容

本发明目的是为解决上述技术问题的不足，提供一种检测二乙烯三胺五乙酸及其螯合物的胶体金试纸及其制备和检测方法，能准确、快速检测鸡肉、猪肉、尿液、蜂蜜等动物源性食品、洗涤剂及水环境中二乙烯三胺五乙酸及其螯合物的残留含量。

本发明为解决上述技术问题所采用的技术方案是：

一种检测二乙烯三胺五乙酸及其螯合物的胶体金试纸，包括反应膜、样本垫、结合物释放垫、吸水垫和背衬；所述反应膜上具有包被二乙烯三胺五乙酸-载体蛋白偶联物的测试区和包被羊抗鼠IgG的质控区，所述结合物释放垫包被二乙烯三胺五乙酸单克隆抗体-胶体金标记物；

所述二乙烯三胺五乙酸-载体蛋白偶联物，由二乙烯三胺五乙酸经过双功能螯合剂 p-NH₂-Bn-DTPA或P-SCN-Bn-DTPA[1-(4-异硫氰苄基)乙烯基三胺-N,N,N',N,N'-五乙酸]与载体蛋白偶联得到；