[发明专利]用于飞行时间质谱检测蛋白和核酸的通用芯片的制备方法

权利要求书

1.一种用于飞行时间质谱检测蛋白和核酸的两用芯片的制备方法，其中所述芯片包括：(1)芯片主体：主体表面具有微阵列排列的亲水性点样孔和疏水性孔外区；(2)由金属底板构成的芯片适配器，其中该适配器表面分布多个与芯片主体匹配的芯片卡槽，其中，芯片基底选自质地坚韧、平面度佳的单面抛光的金刚石、单晶硅、石英晶体的芯片，所述亲水性点样孔覆盖150‐800nm的亲水性薄膜，疏水性孔外区覆盖150nm‐2μm疏水性薄膜，其表面水滴接触角＞120°；其中所述方法包括以下步骤：

(1)选用质地坚韧、平面度佳的芯片作为基底；

(2)对芯片表面进行亲水处理；

(3)用光刻胶对亲水性点样孔的封闭处理；

(4)用硅烷偶联剂处理芯片，其中硅烷偶联剂选自乙烯基硅烷、氨基硅烷、二甲基二氯硅烷；

(5)对光刻胶封闭的点样区进行恢复处理；

(6)将芯片与金属芯片适配器进行匹配安装；

其中预先使用α‐氰‐4‐羟基肉桂酸和/或3，5‐二甲氧基‐4‐羟基肉桂酸溶液对点样孔进行预处理，或者预先使用3‐羟基‐2‐吡啶甲酸溶液对点样孔进行预处理。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(2)中通过氧气流速60～140ml/min，功率100～300W，处理时间1～10min；再用高纯水对基底表面超声清洗2～3次，每次时间为2～5min，使表面彻底清洁并羟基化。

3.根据权利要求1的方法，其中，步骤(3)中采用旋涂的方法将光刻胶旋涂于处理过的基底上，旋涂速度为1000～8000rpm，然后置于光刻掩膜板下，在390nm的紫外光下曝光20s～5min后用相应的显影液洗脱后，从而构筑出有序结构的点样孔区，其中光刻胶使用耐酸性的聚甲基丙烯酸甲酯、聚苯乙烯。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(4)中包括：

(i)清洗芯片：将先后浸入丙酮、甲醇水溶液、氯仿，分别清洗后，取出干燥；

(ii)在加热条件下，将浓酸和双氧水缓慢加入含有芯片的水溶液中，进行充分氧化反应后，分别在氯仿、超纯水中进行清洗，该步骤重复多次；

(iii)将芯片置于干净容器中，加入预先水解的硅烷偶联剂溶液，并加入氨水催化，直至硅烷化反应充分完成；

(iv)取出芯片，分别置于乙醇、超纯水、氯仿中，超声清洗；

(v)将清洗后的芯片，测量并选择接触角＞120°的芯片，作为合格芯片。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(5)中包括：

将硅烷化处理后的芯片，放入去胶液中，浸泡3小时；

芯片取出，放入丙酮溶液中，超声处理2分钟，即可去掉光刻胶，恢复点样区亲水表面，形成有亲疏水差异的微阵列芯片表面；

其中，去胶液为聚乙二醇单丁醚或聚二甲基硅氧烷溶液。