[发明专利]一种快速检测石蒜科植物中加兰他敏含量的方法

权利要求书

1.一种快速检测石蒜科植物中加兰他敏含量的方法，包括如下步骤：

1)配制待测样品液

称取待测样品，冷冻干燥后研磨成粉，以醇类有机溶剂作为提取剂，进行至少两次超声提取、混匀、离心，合并上清，浓缩，再复溶，稀释至浓度0.5～100ng/ml，得待测样品溶液；

2)检测

利用液相色谱-串联二级质谱对待测样品溶液进行检测，获得样品中加兰他敏的峰面积数据；

其中，色谱条件：

液相色谱柱：硅胶型反相色谱柱；

柱温：40～50℃；

进样量：5～10μL；

流速：0.4～1.0ml/min；

流动相：流动相A：甲酸-水溶液，流动相B：乙腈或甲醇；

洗脱方法：等度洗脱，洗脱时间≤3.0min，流动相A和流动相B的体积比为10～50：50～90；

质谱条件及扫描方式：

离子源：加热电喷雾离子源或电喷雾离子源；

离子源喷雾电压：2500～4500V；

扫描方式：正离子扫描下以一级质谱全扫描-数据依赖子离子扫描模式或多反应检测模式进行分析；

监测离子对：母离子m/z 288±1Da和至少一个加兰他敏的子离子；

加兰他敏保留时间：≤1min；

3)含量计算

根据步骤2)的峰面积数据和加兰他敏的标准曲线获得待测样品溶液中加兰他敏的浓度，再结合步骤1)中复溶溶剂体积以及待测样品干重，计算样品中加兰他敏的含量。

2.根据权利要求1所述快速检测石蒜科植物中加兰他敏含量的方法，步骤3)中所述加兰他敏的标准曲线是通过以下方法获得的：取加兰他敏标准品，配制成浓度在0.5ng/ml～100ng/ml的系列标准溶液，利用液相色谱-串联二级质谱对加兰他敏标准溶液进行测定，利用测得的峰面积数据和加兰他敏标准溶液浓度绘制标准曲线，得到线性方程。

3.根据权利要求2所述快速检测石蒜科植物中加兰他敏含量的方法，其特征在于，步骤3)中所述测定加兰他敏标准溶液的色谱条件及质谱条件与步骤2)相同。

4.根据权利要求1所述快速检测石蒜科植物中加兰他敏含量的方法，其特征在于，步骤3)中所述流动相A的甲酸-水溶液中，甲酸的含量0.1～1％，v/v。

5.根据权利要求1所述快速检测石蒜科植物中加兰他敏含量的方法，其特征在于，步骤2)中二级质谱监测加兰他敏子离子的质荷比m/z范围为57～288Da。

6.根据权利要求1或5所述快速检测石蒜科植物中加兰他敏含量的方法，其特征在于，步骤2)中所述加兰他敏的子离子选自质荷比m/z为231±1Da、213±1Da和198±1Da中的至少一种。

7.根据权利要求1所述快速检测加兰他敏含量的方法，其特征在于，步骤3)中所述的洗脱时间为3.0min，加兰他敏的保留时间为0.77～0.99min。

8.根据权利要求1-7任一项所述快速检测加兰他敏含量的方法，其特征在于，步骤2)中所述复溶溶剂为甲醇，提取剂为甲醇或乙醇，待测样品鲜重与提取剂的质量体积比为1：2-5，g/ml。

9.根据权利要求1-7任一项所述快速检测加兰他敏含量的方法，其特征在于，步骤2)中所述柱温为40℃，进样量为5μL，流速为0.4ml/min，离子源为加热电喷雾离子源，扫描方式为正离子Full MS/dd-MS2，离子源喷雾电压2500V。

10.根据权利要求1-7任一项所述快速检测加兰他敏含量的方法，其特征在于，步骤2)中超声提取时间为15-40min。