[发明专利]一种溶酶体次氯酸荧光探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种溶酶体次氯酸荧光探针，化学名称为8,8,9-三甲基-5-（2-吗啉乙基）-9,10-二氢苯并[de]吡咯[2,3-9]异喹啉-4,6（5H,8H）二酮，具有如下式（I）所示的结构：

式（I）。

2.根据权利要求1所述溶酶体次氯酸荧光探针，其特征在于，以吗啉基团为溶酶体定位基团。

3.一种如权利要求1所述溶酶体次氯酸荧光探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）4-溴-1,8-萘二甲酸酐与氨乙基吗啉在溶剂中加热回流，生成4-溴-N-（2-吗啉基乙基）萘酰亚胺：

；

（2）4-溴-N-（2-吗啉基乙基）萘酰亚胺与水合肼在溶剂中加热回流搅拌，生成4-肼基-N-（2-吗啉基乙基）萘酰亚胺：

；

（3）在催化剂下，将化合物4-肼基-N-（2-吗啉基乙基）萘酰亚胺和过量的3-甲基-2-丁酮加热回流，得8,8,9-三甲基-5-（2-吗啉乙基）苯并[de]吡咯[2,3-9]异喹啉-4,6（5H,8H）二酮：

；

（4）8,8,9-三甲基-5-（2-吗啉乙基）苯并[de]吡咯[2,3-9]异喹啉-4,6（5H,8H）二酮在溶剂中，经硼氢化钠还原得到8,8,9-三甲基-5-（2-吗啉乙基）-9,10-二氢苯并[de]吡咯[2,3-9]异喹啉-4,6（5H,8H）二酮：

。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，4-溴-1,8-萘二甲酸酐与氨乙基吗啉的摩尔比为1:1-1.5；步骤（2）中，4-溴-N-（2-吗啉基乙基）萘酰亚胺与水合肼的摩尔比为1:20-70；步骤（4）中，8,8,9-三甲基-5-（2-吗啉乙基）苯并[de]吡咯[2,3-9]异喹啉-4,6（5H,8H）二酮与硼氢化钠的摩尔比为1:2-3。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，4-溴-1,8-萘二甲酸酐的浓度为0.8-1.2mol/L；步骤（2）中，4-溴-N-（2-吗啉基乙基）萘酰亚胺的浓度为0.1-0.5mol/L；水合肼质量浓度为40-80%；步骤（4）中，8,8,9-三甲基-5-（2-吗啉乙基）苯并[de]吡咯[2,3-9]异喹啉-4,6（5H,8H）二酮的浓度为1.0 mmol/L。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）和（2）中，所述溶剂为乙醇；加热温度为80℃，加热时间为2-4 h；步骤（3）中，所述催化剂为浓硫酸；反应条件为惰性气体保护；加热温度为100℃，加热时间为3-6 h；步骤（4）中，所述溶剂为甲醇；反应温度为小于5℃。

7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中4-肼基-N-（2-吗啉基乙基）萘酰亚胺经柱层析分离得到，淋洗剂为体积比30:1的二氯甲烷和甲醇；步骤（3）中8,8,9-三甲基-5-（2-吗啉乙基）苯并[de]吡咯[2,3-9]异喹啉-4,6（5H,8H）二酮过柱色谱分离提纯，淋洗剂为体积比1:50的乙醇和二氯甲烷；步骤（4）中8,8,9-三甲基-5-（2-吗啉乙基）-9,10-二氢苯并[de]吡咯[2,3-9]异喹啉-4,6（5H,8H）二酮经过柱色谱分离得到，淋洗剂为体积比2:50的乙醇和二氯甲烷。

8.一种如权利要求1所述溶酶体次氯酸荧光探针在制备检测溶液及细胞溶酶体次氯酸含量的荧光探针中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，荧光检测溶液中次氯酸的激发波长为390nm；pH为7.0-7.4时，荧光发射波长为446nm；pH为5-5.5时，荧光发射波长为490nm。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，双光子细胞荧光成像激发波长为780 nm，发射波段为500-540 nm和560-620 nm；单光子荧光成像激发波长为405 nm，发射波段为500-540 nm和560-620 nm。