[发明专利]一种唾液中分泌型免疫球蛋白的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学检测技术领域，尤其涉及一种唾液中分泌型免疫球蛋白的检测方法。

背景技术

疲劳,是劳动过程中劳动者由于生理和心理状态的变化，产生某一个或某些器官乃至整个机体力量的自然衰竭状态。疲劳是一种生理现象，也是一种心理现象，从本质上讲是机体的一种正常生理保护机制。从生物医学理论上讲，劳动是能量消耗的过程，这个过程持续到一定程度，中枢神经系统将产生抑制作用，继中枢神经系统疲劳后，就是反射运动神经系统的疲劳，反映出动作的灵敏性降低，作业效率下降。疲劳发生的原因较多，由过多运动、长时间连续工作、精神紧张、睡眠剥夺、视觉疲劳及其它疾病因素导致。疲劳发生后，人体在生理、生化和代谢方面都存在一些共性改变，尤其是在部队军事训练中，疲劳不仅会影响到训练成绩的提高，过度的疲劳还会损害机体的肌肉系统、心血管系统、神经系统、内分泌系统等多种系统，导致食欲降低、体重下降、睡眠障碍等症状。在日常训练中，持续长时间大强度的训练使得机体难以承受，最终对机体造成严重损伤。

分泌型免疫球蛋白sIgA是机体黏膜免疫系统的主要成分，唾液sIgA在上呼吸道黏膜免疫中起着至关重要的作用，它能抑制微生物在上呼吸道上皮附着，减缓病毒繁殖，防止病原体入侵，是黏膜免疫状况的一个标志。耐力性竞赛会引起唾液sIgA水平下降，Tomasi等最先报道了运动与唾液sIgA的相关研究，结果显示滑雪运动员在历时2h～3h的20km～50km比赛后，唾液sIgA浓度下降40％；Nieman等对93名受试者的研究也显示，马拉松赛后唾液sIgA浓度和唾液sIgA分泌率均显著下降。此外，实验室有关研究还得到了基本一致结果：训练有素的男女长跑运动员进行90min的55％VO₂max和75％VO₂max跑步运动后，唾液sIgA分泌率下降了20％-50％。多数实验性研究显示，短时间大强度力竭运动后，人体唾液sIgA水平会出现不同程度的下降。因此可以根据唾液中的分泌型免疫球蛋白浓度变化来判断人体的疲劳程度，这必然涉及到唾液中分泌型免疫球蛋白的检测。

目前，测定唾液中的分泌型免疫球蛋白常用方法有放射免疫法和单相琼脂扩散法。放射免疫法快速、灵敏度高，但成本较高；单相琼脂扩散法比较简单，但影响因素较多，重复性差，耗时较长。透色比浊法可用于血中免疫球蛋白的测定，但由于唾液中免疫球蛋白的含量较少，测定难度较大，目前鲜有相关报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的是提供一种唾液中分泌型免疫球蛋白的检测方法，操作方便，具有较高的精确度，采用了改性后的聚丙烯膜作为微滤膜对唾液样品进行处理，提高了唾液中分泌型免疫球蛋白检测的准确度和灵敏性。

本发明通过以下技术手段解决上述技术问题：

一种唾液中分泌型免疫球蛋白的检测方法，包括以下步骤：

抗体应用液配置：称取40g聚乙二醇、0.8g聚山梨酯溶于1L去离子水中，搅拌混匀得到应用液，将羊抗人免疫球蛋白血清与应用液按体积比18:1混合，搅拌均匀得到抗体应用液。

标样检测：于干净试管中加入标准血清，用生理盐水稀释至50μL，再加入抗体应用液1mL，混匀，置于38℃的热水中水浴10min后，以生理盐水作参比通过分光光度计测定标准血清的吸光度。

样品采集：采集自然流出的清亮唾液，保存于温度为-30℃～-20℃的环境中

样品处理：将采集的唾液通过离心机冷冻离心后，取上清液通过微滤膜过滤，所述微滤膜的平均孔径为5μm～20μm,得到的滤液即待测样品。

样品检测：取50μL待测样品并加入1mL抗体应用液，混匀，置于38℃的热水中水浴10min后，以生理盐水作参比通过分光光度计测定样品的吸光度。

进一步，所述样品处理步骤中的唾液冷冻离心是在1℃～4℃、4000r/min～5000r/min的条件下离心6min～9min。

进一步，所述标样检测和样品检测的检测波长均为350nm。

进一步，所述微滤膜为聚丙烯中空纤维膜接枝聚丙烯酸制得。

进一步，所述聚丙烯中空纤维膜接枝聚丙烯酸的接枝率为10％～16％。