[发明专利]一种京尼平交联脱细胞神经支架及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及神经支架材料技术领域，具体涉及一种京尼平交联脱细胞神经支架及其制备方法与应用。

背景技术

周围神经损伤是临床常见的疾病，其对应的肢体运动，感觉功能完全丧失，肌肉萎缩给患者带来极大痛苦并造成社会负担。目前周围神经损伤的修复方法大多采用显微外科技术，即神经缝合术、自体神经移植术、神经植入术等。但是神经缝合及植入往往引起神经黏连和瘢痕形成，并且植入成功修复神经损伤的成功率较低，是神经外科学亟待解决的难题。

大量研究发现，在神经损伤修复中，在吻合处使用生物膜包绕，阻隔外部环境的影响，减少炎性细胞浸润可有效防止黏连和瘢痕形成，并充分发挥远端神经的趋化作用(Mackinnon,S.E.and A.R.Hudson,Clinical application of peripheral nerve transplantation.Plast Reconstr Surg,1992.90(4):p.695-9.)。而与使用其他可降解生物材料相比，去细胞神经支架材料在修复神经缺损时表现出更好的生物相容性和生物力学性能，并且更易引导神经再生。

由于自身神经来源受限且异体异种神经具有免疫原性，因此，神经支架材料应去除神经细胞成分并最大程度保留细胞外基质成分(Wang,Q.,et al.,The preparation and comparison of decellularized nerve scaffold of tissue engineering.J Biomed Mater Res A,2014.102(12):p.4301-8.)。目前证明对异种动物组织采用去细胞技术处理可获得无免疫原性神经支架。现在常用的神经去细胞方法包括化学法和物理法。但是物理法去细胞不彻底，化学法所用化学物质难以完全去除，残留对神经细胞附着再生有影响，因此，急需寻找新的方法改进神经支架的去细胞效果。

本申请人课题组在前期研究中利用一种新型的深海细菌酶——Myroilysin处理Wistar大鼠坐骨神经，获得了脱细胞神经支架。Myroilysin酶具有特异性，除溶解弹力蛋白和膨胀胶原外，不会破坏神经组织中的其他结构与成分，与天然神经细胞外基质非常相似。组织学观察发现，Myroilysin脱细胞神经支架具有彻底的脱细胞效果，所保留的神经基底膜结构均匀一致。但在后续的研究中发现，Myroilysin酶对其储存的条件要高，而且在储存过程中酶的生物效价会发生变化，导致在制备脱细胞神经支架时需要对酶的加入量和处理时间等制备条件进行重新摸索。若制备条件选择不当，则会导致制备的脱细胞神经支架的强度降低，进而影响脱细胞神经支架材料的机械性能，使其难以满足植入部位的力学要求。

发明内容

针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种京尼平交联脱细胞神经支架及其制备方法。

本发明的另一目的是提供上述京尼平交联脱细胞神经支架在作为周围神经损伤修复材料中的用途。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面，提供一种京尼平交联脱细胞神经支架的制备方法，步骤如下：

将离体动物神经组织用Tris-HCl溶液冲洗；将冲洗后的离体动物神经组织浸入Myroilysin溶液进行孵育；孵育后加入含有京尼平的Tris-HCl溶液进行交联；交联后再用Tris-HCl溶液冲洗，即制备得到京尼平交联脱细胞神经支架。

上述制备方法中，冲洗用的Tris-HCl溶液的浓度为50mM，pH9.0。

上述制备方法中，所述Myroilysin溶液的浓度为0.2-0.8mg/ml；优选为0.4mg/ml。

上述制备方法中，孵育的温度为37℃，孵育的时间为12-48h；优选的，孵育的时间为24h。

上述制备方法中，含有京尼平的Tris-HCl溶液中京尼平的浓度为0.2-0.3mg/ml；优选为0.25mg/ml。

上述制备方法中，含有京尼平的Tris-HCl溶液中，Tris-HCl溶液的浓度为50mM，pH7.2。

上述制备方法中，交联的温度为37℃，交联的时间为12h。

本发明的第二方面，提供上述制备方法制备得到的京尼平交联脱细胞神经支架。