[发明专利]一种心脏干细胞及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种心脏干细胞及其用途，具体是一种表达TNFR2的心脏干细胞及其在制备治疗人类缺血性心脏病的药物中的用途。

背景技术

心血管疾病是世界范围内威胁人类生命的最主要疾病之一，其中急性心肌梗塞是冠心病中最严重的疾病，具有很高的发病率和死亡率。心肌梗死会造成不可逆性功能心肌细胞数量的减少，导致心肌收缩功能降低。目前心梗传统的治疗方法主要包括药物治疗、介入治疗和手术治疗，虽能改善心肌缺血症状，但都无法挽救已坏死的心肌细胞。

干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞，可以替代损伤的心肌细胞，构建新的血管，修复心脏泵血功能，为心梗的治疗提供了一种新的选择。越来越多的证据支持成年心脏干细胞(Cardiac stem cells,CSCs)的存在，并在缺血状态下被激活，在心脏功能修复中发挥重要作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种心脏干细胞，本发明还提供了所述心脏干细胞的用途，所述心脏干细胞为治疗人类缺血性心脏病提供了新的治疗策略。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：鉴定一种心脏干细胞，所述心脏干细胞表达TNFR2。

同时，本发明还提供一种所述心脏干细胞在制备心肌细胞中的用途。

另外，本发明还提供一种所述心脏干细胞在制备治疗心肌梗塞的药物中的用途。

此外，本发明还提供一种所述心脏干细胞在制备治疗人类缺血性心脏病中的用途。

本发明的有益效果在于：本发明提供了一种心脏干细胞及其用途，所述心脏干细胞能够表达TNFR2，所述心脏干细胞能够分化为心肌细胞，为治疗人类缺血性心脏病提供了一种新的治疗策略，具有重大研究意义。

附图说明.

图1为本发明的实验技术路线图；

图2为利用GiWi-心脏干细胞分化的方法获取iPSC-CSC；A.GiWi-心脏干细胞分化方法的流程图；B.QPCR检测TNFR2,GATA4以及ISL1在已分化的 iPSC-CSC中的表达结果，纵坐标表示靶基因相对于内参(GAPDH)表达的百分比，横坐标表示hESCs细胞系和分化的CPC细胞；C.iPSC-CSC中TNFR2, NKX2.5以及GATA4的免疫荧光染色图像(10×)；D.iPSC-CSC中TNFR2以及原肌球蛋白的免疫荧光染色(63×)；E.iPSC-CSC中NKX2.5以及原肌球蛋白的免疫荧光染色(63×)；F.iPSC-CSC中NKX2.5,TNFR2以及原肌球蛋白的免疫荧光染色(63×)；G.iPSC-CSC中Ki67,TNFR2以及原肌球蛋白的免疫荧光染色(63×)；

图3为在标准规范条件下将CSC以及成熟CM进行分化；分别利用qRT-PCR 和IB的方法在基因水平(A)和蛋白水平(B)进行检测，与对照组比起来，OCT4 只在人的胚胎干细胞中表达，而α-SA只在成熟心肌细胞中表达；

图4为本发明实施例2中TNFR2中和抗体抑制心肌细胞分化。A－B： NKx2.5和cTnT阳性细胞染色及定量。C：NKx2.5mRNA表达定量；

图5为本发明实施例2中R2-TNF促进心肌细胞分化。

具体实施方式

为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例及附图对本发明作进一步说明。

实验技术路线如附图1所示。

实验方法具体为：

用四环素诱导的慢病毒载体转染H1hESCs细胞系(US National Institutes of Health-registered as WA01)或，表达对照shRNA,TNFR2或Bmx shRNA，同时共表达GFP。采用诱导的shRNA系统拮抗各阶段已知的因子，例如Nkx2.5/ Gata4作为对照。相反，构建过表达的TNFR2或Bmx。诱导的慢病毒shRNA 系统可以在分化的特定阶段下调目标基因。应用GFP共表达检测转染效率，并特异性追踪转染细胞。采用qRT-PCR，IB，FACS检测hESCs中的下调或上调的TNFR2。