[发明专利]一种片段法合成西曲瑞克的方法

权利要求书

1.一种片段法合成西曲瑞克的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(a)固相合成片段A肽树脂:Ac-D-2Nal-D-Phe(4Cl)-D-3Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-CTC树脂；

(b)固相合成片段B肽树脂：H-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Sieber树脂；

(c)裂解片段A肽树脂得肽片段A：Ac-D-2Nal-D-Phe(4Cl)-D-3Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OH；

(d)裂解片段B肽树脂得片段B：H-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-CONH₂；

(e)在缩合剂存在下，片段肽A和片段肽B缩合得到西曲瑞克全保护肽Ac-D-2Nal-D-Phe(4Cl)-D-3Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-CONH₂；

(f)西曲瑞克全保护肽经裂解试剂脱保护、制备色谱纯化及转盐、冻干后，得到西曲瑞克精肽。

2.根据权利要求1所述的片段法合成西曲瑞克的方法，其特征在于，步骤(a)固相合成片段A肽树脂的方法为：采用CTC树脂为固相载体，与Fmoc-Tyr(tBu)–OH发生偶联反应得到Fmoc-Tyr(tBu)-CTC树脂；然后脱Fmoc后，以2-4倍摩尔量的投料比依次分别偶联Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-D-3Pal-OH、Fmoc-D-Phe(4Cl)-OH、Fmoc-D-2Nal-OH，每一个氨基酸的偶联均在缩合剂存在条件下进行，每一步偶联过程中均以Kaisertest试剂检测反应终点，反应结束后，进行洗涤，然后采用脱保护试剂脱Fmoc保护后，再与下一个Fmoc保护氨基酸进行偶联反应；从而得到Fmoc-D-2Nal-D-Phe(4Cl)-D-3Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-CTC树脂；再进行脱Fmoc后，加入乙酰化试剂进行乙酰化封端，从而的到片段A肽树脂:Ac-D-2Nal-D-Phe(4Cl)-D-3Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-CTC树脂。

3.根据权利要求2所述的片段法合成西曲瑞克的方法，其特征在于，步骤(a)中CTC树脂替代度为0.3-1.2mmol/g。

4.根据权利要求2所述的片段法合成西曲瑞克的方法，其特征在于，步骤(a)中CTC树脂替代度优选为0.6-1.0mmol/g。

5.根据权利要求1所述的片段法合成西曲瑞克的方法，其特征在于，步骤(b)中固相合成片段B肽树脂的方法为：采用Sieber树脂为固相载体，Sieber树脂脱Fmoc后，以2-5倍摩尔量的投料比依次分别偶联Fmoc-D-Ala-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Cit-OH，每一个氨基酸的偶联均在缩合剂存在条件下进行，每一步偶联过程中均以Kaiser test检测反应终点，反应结束后洗涤，然后脱Fmoc保护，再与下一个Fmoc保护氨基酸进行偶联反应；得到H-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Sieber树脂。

6.根据权利要求5所述的片段法合成西曲瑞克的方法，其特征在于，步骤(b)所述Sieber树脂替代度为0.3-1.0mmol/g。

7.根据权利要求5所述的片段法合成西曲瑞克的方法，其特征在于，步骤(b)所述Sieber树脂替代度优选为0.6-1.0mmol/g。

8.根据权利要求1所述的片段法合成西曲瑞克的方法，其特征在于，步骤(c)和步骤(d)所述裂解所用的裂解试剂为TFE/DCM、TFA/DCM、AcOH/TFE/DCM、HFIP/DCM组合中的一种。

9.根据权利要求2或5所述的片段法合成西曲瑞克的方法，其特征在于，所述脱Fmoc所用的试剂为体积百分含量15～25％哌啶/DMF溶液；偶联反应中选用的缩合剂为DIC/HOBT、DIC/HOAT、TBTU/HOBT/DIEA、HATU/HOAT/DIEA、PyAOP/HOAT、PyAOP/HOAT/DIEA或者PyBOP/HOBT/DIEA组合中的一种。

10.根据权利要求1所述的片段法合成西曲瑞克的方法，其特征在于，步骤(e)中所述裂解试剂为加入体积比1-5％清除剂的TFA溶液，所述清除剂为苯甲醚、苯甲硫醚、乙二硫醇、巯基乙醇、苯酚、水中的一种或几种。