[发明专利]一种新鲜羊膜保存液及新鲜羊膜保存方法与应用

说明书

本发明提供一种新鲜羊膜保存液，以1000ml保存液计，由如下组分组成：DMEM培养基30～50g，硫酸软骨素20～30g，低分子右旋糖酐10～20g，丙酮酸钠5～10ml，非必须氨基酸10～20ml，赤霉素5～10ml，HEPES 10～20ml，季戊四醇10～20g，氯化铵2～3g，DMPU 3～5ml，纳米二氧化硅15～20g，胡萝卜素8～10ml，吲哚乙酸12～15ml，氰氨化钙5～6g，氢化可的松3～5g，余量为注射用水。使用本发明保存液可以在常温下保存新鲜羊膜，保存时间可达1～2周，4℃下可以保存1年以上，方便使用；羊膜的形态未改变，羊膜中含有的细胞活性因子保存率较高。

技术领域

本发明涉及一种新鲜羊膜保存液，尤其是涉及一种新鲜羊膜保存液及新鲜羊膜保存方法与应用。

背景技术

羊膜(厚约0.02～0.05mm)来源于胚胎，是一种透明、无神经、血管和淋巴管、低抗原性且具有韧性的组织，由上皮细胞层、基底膜、基质层、纤维母细胞层、海绵层组成。羊膜在促进上皮修复、愈合及分化，抑制炎症，抗新血管生成，抑制纤维化及瘢痕化，防止睑球粘连等眼科多个领域发挥着重要的作用。随着羊膜用量的不断增加，羊膜的保存，尤其是羊膜活性成分的保存，成了当前眼科界研究的一个热点。

现在使用较为普遍的羊膜保存液为DMEM和甘油混合液(体积比为DMEM∶甘油＝1∶1)，将羊膜片放入装有DMEM和甘油混合液的容器中，密封置-70℃冰箱保存备用，该保存液会使羊膜上皮细胞形态有所改变，代谢酶活性和生长因子的表达有所降低，但过快的降温会造成细胞水肿，发生老化及功能减退，影响羊膜的品质。

申请号为200710150436.9、公开号为CN101444202A的中国专利公开了“一种新鲜羊膜保存液及新鲜羊膜保存方法与应用”，该新鲜羊膜保存液的组成及含量为：DMEM培养基9.0-12.0克，硫酸软骨素10.0-25.0克，透明质酸钠0.5-1.0克，HEPES4.0-5.0克，右旋糖苷10.0-15.0克，庆大霉素1.0-3.0毫升，地塞米松24.0-30.0毫克，非必需氨基酸10.0-15.0毫升，还原型谷胱甘肽0.50-0.95克，胎牛血清20.00-50.0毫升，注射用水加至1000毫升。该新鲜羊膜保存液具有在4℃冰箱中保存，将新鲜羊膜保存期延长20-30天的特点。但具有如下不足之处：该保存液中加入了血清成分，增加了病毒在羊膜与保存液之间传播的机会；只是稍稍延长羊膜保存时间；需要在4℃下保存，不能常温保存；羊膜中含有的活性因子丢失率高。

发明内容

为解决上述现有技术中所存在的问题，本发明提供一种可以常温保存，且保存时间长、羊膜中含有的活性因子丢失率低、成本低的羊膜长期保存液。

本发明采用如下技术方案实现：一种新鲜羊膜保存液，以1000ml保存液计，由如下组分组成：DMEM培养基30g～50g，硫酸软骨素20g～30g，低分子右旋糖酐10g～20g，丙酮酸钠5ml～10ml，非必须氨基酸10ml～20ml，赤霉素5ml～10ml，HEPES 10ml～20ml，季戊四醇10g～20g，氯化铵2g～3g，DMPU 3ml～5ml，纳米二氧化硅15g～20g，胡萝卜素8ml～10ml，吲哚乙酸12ml～15ml，氰氨化钙5g～6g，氢化可的松3g～5g，余量为注射用水。

优选地，所述的新鲜羊膜保存液，以1000ml保存液计，由如下组分组成：DMEM培养基42g，硫酸软骨素24g，低分子右旋糖酐16g，丙酮酸钠8ml，非必须氨基酸15ml，赤霉素8ml，HEPES 16ml，季戊四醇13g，氯化铵2g，DMPU 4ml，纳米二氧化硅18g，胡萝卜素9ml，吲哚乙酸13ml，氰氨化钙6g，氢化可的松4g，余量为注射用水。

优选地，所述非必需氨基酸为除8种必需氨基酸外的多种氨基酸，包括甘氨酸、谷氨酸、丙氨酸、丝氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、酪氨酸、半胱氨酸、精氨酸和组氨酸中的至少一种。

本发明还提供一种新鲜羊膜的保存方法，具体为，使用上述的新鲜羊膜保存液进行保存。