[发明专利]一种MDA‑MB‑231乳腺癌细胞的复苏方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术应用领域，具体地，涉及一种MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法。

背景技术

乳腺癌是女性最常见的癌症，主要包括导管癌和小叶癌。2016年美国CA（A Cancer Journal for Clinicians）公布的最新统计数据显示，美国2016年预计将有420840例女性患乳腺癌，占女性新发恶性肿瘤的38%，居女性恶性肿瘤发病率第一位，并且死亡人数将达52930例。更为严重的是全球的乳腺癌发病率正在逐年增长。

细胞培养是生物与健康相关研究领域的一项重要技术。随着生命科学的迅速发展，目前细胞培养已成为细胞生物学、分子生物学、遗传学和免疫学等学科研究的重要基础。为了深入探讨细胞的生长活动规律、有关疾病的病理和药物的药理（毒理）机制，开发具有不同针对性的细胞培养方法具有重要意义。

其中，MDA-MB-231乳腺癌细胞作为人源性高转移乳腺癌细胞，常用于乳腺癌的体内外研究。细胞复苏是培养细胞的一种，是生命及再生医学领域中广泛应用的关键技术，在研究中往往需要对冻存的细胞进行复苏，从而进行乳腺癌转移的相关研究。

本发明所述的MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法稳定性高，能够去除冻存剂对复苏后细胞生长的影响，复苏后的MDA-MB-231乳腺癌细胞存活率高，细胞生长速度快，细胞状态好，边界清晰，可以有利于乳腺癌转移的相关研究。

发明内容

发明目的：本发明提供了一种MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法。

技术方案：本发明提供了一种MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法，包括以下步骤：将冻存的MDA-MB-231乳腺癌细胞冻存管从液氮或者-80℃冰箱中取出，在取出后1min内于37℃摇晃至含有MDA-MB-231乳腺癌细胞专用冻存液的MDA-MB-231乳腺癌细胞液完全融化，将MDA-MB-231乳腺癌细胞液加入到盛有2-3ml新鲜MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基的离心管中，用移液枪上下吹打20-30次，于1000-1500g/min的转速下离心3-10min；移去上清液，加入1-2ml的新鲜MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基，用移液枪上下吹打40-50次，然后均匀的加入到盛有7-9ml的新鲜MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基的细胞培养皿中，于37℃，5%CO₂培养箱中培养；所述MDA-MB-231乳腺癌细胞专用冻存液以重量组分计，包括以下组分：二甲基亚砜5-15份、羟甲基淀粉2-5份、海藻糖3-12份、维生素E0.5-3份、25%山梨醇1-5份、丙二醇0.8-1.6份、(S)-(-)-1-(4-氟异喹啉-5-基)磺酰基-2-甲基-1,4-二氮环庚烷0.5-2份和基础培养基80-90份。本发明所述的MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法稳定性高，能够去除冻存剂对复苏后细胞生长的影响，复苏后的MDA-MB-231乳腺癌细胞存活率高，细胞生长速度快，细胞状态好，边界清晰，可以有利于乳腺癌转移的相关研究。同时，MDA-MB-231乳腺癌细胞专用冻存液对细胞损伤上，25%山梨醇为渗透性保护液，而(S)-(-)-1-(4-氟异喹啉-5-基)磺酰基-2-甲基-1,4-二氮环庚烷则抑制细胞活动和基因表达，维生素E的抗氧化性好，在保证休眠细胞的营养的同时还可以显著减少对细胞的损伤，提高冻存细胞的存活率，并且在增殖方面也保持很好的状态。

进一步的，上述的MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法，所述MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基包括70-90%的基础培养基以及10-30%的胎牛血清。MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基，组分合理，可以进一步为复苏的细胞的提供营养物质。