[发明专利]一种高稳定性MCF‑7乳腺癌细胞的复苏方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术应用领域，具体地，涉及一种高稳定性MCF-7乳腺癌细胞的复苏方法。

背景技术

乳腺癌是女性最常见的癌症，主要包括导管癌和小叶癌。2016年美国CA（A Cancer Journal for Clinicians）公布的最新统计数据显示，美国2016年预计将有420840例女性患乳腺癌，占女性新发恶性肿瘤的38%，居女性恶性肿瘤发病率第一位，并且死亡人数将达52930例。更为严重的是全球的乳腺癌发病率正在逐年增长。

细胞培养是生物与健康相关研究领域的一项重要技术。随着生命科学的迅速发展，目前细胞培养已成为细胞生物学、分子生物学、遗传学和免疫学等学科研究的重要基础。为了深入探讨细胞的生长活动规律、有关疾病的病理和药物的药理（毒理）机制，开发具有不同针对性的细胞培养方法具有重要意义。

其中，MCF-7乳腺癌细胞作为人源性高转移乳腺癌细胞，常用于乳腺癌的体内外研究。细胞培养基是培养细胞的营养物质，是生命及再生医学领域中广泛应用的关键技术。尤其随着细胞治疗个性化技术的兴起，体外扩增特殊功效的细胞成了临床前研究以及临床治疗的重点研发项目。

本发明的方便快速的MCF-7乳腺癌细胞的复苏方法，应用方便，稳定性好，复苏后的MCF-7细胞去除了冻存液的影响，生长速度快，细胞状态好，边界清晰，可以方便应用于乳腺癌的原位生长、血管生成以及与其他乳腺癌高转移性细胞进行对比研究等的相关研究。

发明内容

发明目的：本发明提供了一种高稳定性MCF-7乳腺癌细胞的复苏方法。

技术方案：本发明提供了一种高稳定性MCF-7乳腺癌细胞的复苏方法，包括以下步骤：将冻存的MCF-7乳腺癌细胞冻存管从液氮或者-80℃冰箱中取出，在取出后1min内于37℃摇晃至含有MCF-7乳腺癌细胞专用冻存液的MCF-7乳腺癌细胞液完全融化，将MCF-7乳腺癌细胞液加入到盛有2-3ml新鲜MCF-7乳腺癌细胞专用培养基的离心管中，用移液枪上下吹打20-30次，于1000-1500g/min的转速下离心3-10min；移去上清液，加入1-2ml的新鲜MCF-7乳腺癌细胞专用培养基，用移液枪上下吹打40-50次，然后均匀的加入到盛有7-9ml的新鲜MCF-7乳腺癌细胞专用培养基的培养皿中，于37℃，5%CO₂培养箱中培养；所述MCF-7乳腺癌细胞专用冻存液以重量组分计，包括以下组分：二甲基亚砜5-15份、羟甲基淀粉2-5份、山梨糖3-12份、维生素C1-4份、50%高渗葡萄糖0.8-3份、丙二醇1-1.5份、(S)-(-)-1-(4-氟异喹啉-5-基）磺酰基-2-甲基-1,4-二氮环庚烷0.3-3份和基础培养基80-90份。本发明所述的高稳定性MCF-7乳腺癌细胞的复苏方法，应用方便，稳定性好，复苏后的MCF-7细胞去除了冻存液的影响，细胞生长速度快，细胞状态好，边界清晰，可以方便应用于乳腺癌的原位生长、血管生成以及与其他乳腺癌高转移性细胞进行对比研究等的相关研究。其中，50%高渗葡萄糖为渗透性保护液，而(S)-(-)-1-(4-氟异喹啉-5-基)磺酰基-2-甲基-1,4-二氮环庚烷则抑制细胞活动和基因表达，维生素C的抗氧化性好，在保证休眠细胞的营养的同时还可以显著减少对细胞的损伤，提高冻存细胞的存活率，并且在增殖方面也保持很好的状态。

进一步的，上述的高稳定性MCF-7乳腺癌细胞的复苏方法，所述MCF-7乳腺癌细胞专用培养基包括70-90%的基础培养基以及10-30%的胎牛血清。MCF-7乳腺癌细胞专用培养基，组分合理，可以进一步为复苏的细胞的提供营养物质。

进一步的，上述的高稳定性MCF-7乳腺癌细胞的复苏方法，所述基础培养基以重量组分计，包括以下组分：葡萄糖 82-88份、碳酸氢钠 12-25份、丙酮酸钠10-16份、转铁蛋白3-8份、氯化钾35-45份、无水硫酸镁 6-10份、氯化钠70-78份、氯化锂5-8份、无水磷酸二氢钠10-14份、叶酸 0.3-0.5份、肌醇0.8-1.2份、烟酰胺0.3-0.6份、无水氯化钙25-35份、硝酸铁0.2-0.4份、丁二酸6-8份、丁二酸钠12-16份、D-泛酸钙 0.3-0.6份、酒石酸胆碱0.6-0.8份、核黄素0.1-0.3份、盐酸硫胺0.2-0.4份、盐酸吡哆辛 0.3-0.5份、4-（2-羟乙基）-1-哌嗪乙磺酸0.3-0.6份、亚麻油1-1.5份、聚脂肪酸酯0.8-1.6份、酚红钠1-1.3份和去离子水100份。