[发明专利]一种具有抗氧化活性的蓝莓叶多酚制备方法

说明书

技术领域

本发明属于植物提取技术领域，具体涉及一种从蓝莓叶中提取高纯度多酚的方法

背景技术

蓝莓又名笃斯越橘、蓝浆果等，原产于北美，按照植物学分类，属于杜鹃花科越橘亚科越橘属多年生落叶或常绿灌木。与蓝莓果实相比，蓝莓叶的多酚含量更高。南京地区兔眼蓝莓蓝莓叶中多酚含量高达81.82mg没食子酸当量/g干重。蓝莓叶多酚组成主要有咖啡酰奎尼酸类、儿茶素及其聚合物、槲皮素及其糖苷衍生物、山奈酚及其糖苷衍生物等。蓝莓叶多酚是蓝莓叶中的主要生理活性物质，具有抗氧化、抗肿瘤、抗病毒以及降血压、血脂等功效，在医药和保健食品领域具有巨大的应用价值。

目前，研究者将研究重点集中在蓝莓果实，对蓝莓果实中所含有的多糖、花色苷、黄酮以及挥发性香气成分等的研究已经非常成熟，然而对蓝莓叶多酚的研究相对匮乏。近年来随着我国蓝莓产业发展迅速，蓝莓叶作为蓝莓产业的副产物，其保健功能越来越受到消费者的关注。目前，蓝莓叶保健茶、蓝莓叶蛋白肽营养品等功能性食品均有报道。深入研究蓝莓叶多酚的提取、纯化工艺，对开发蓝莓叶天然药物和保健食品、实现蓝莓叶资源的综合利用具有积极意义。

发明内容

目前，蓝莓叶中多酚提取多采用溶剂提取法，存在着时间长、有机溶剂用量大、提取率低等一系列缺点。本申请采用超声波法辅助有机溶剂溶液提取蓝莓叶中多酚化合物，利用超声波产生高速、强烈的空化效应和搅拌作用破坏植物细胞壁，使溶剂渗透到细胞中，从而缩短提取时间、提高提取效率。本发明对乙醇溶液浓度、料液比以及大孔树脂类型进行了优化或者筛选，取得了较好的提取率与提取效果。实现本发明的具体方案如下：

1)将采摘后的蓝莓叶冲洗、干燥、组织捣碎机粉碎成粉末；

2)将蓝莓叶粉末加入乙醇水溶液中，经超声波辅助提取；

3)将步骤2)中的混合物经8层纱布过滤去除残渣得到多酚粗提液1；

4)将多酚粗体液1离心取上清液得到淡黄色多酚粗提液2；

5)将多酚粗体液2倒入旋蒸瓶中旋蒸，待溶液变为黄褐色浓稠液体后停止旋蒸；

6)将步骤5)中得到的旋蒸液冷冻干燥后得到蓝莓叶多酚粗提物并保存于-20℃冰箱中备用。

7)将步骤6)得到的蓝莓叶多酚粗提物用去离子水配成溶液，并用稀盐酸酸化。

8)将步骤7)得到的溶液吸附到大孔树脂柱上；

9)将吸附多酚后的树脂用去离子水冲洗，再用乙醇进行洗脱，将所得洗脱液旋蒸除去乙醇，冷冻干燥后得到多酚提取粉末。

10)将步骤6)中得到的蓝莓叶多酚粗提物和步骤9)中得到的蓝莓叶多酚分别用95％乙醇配制成梯度浓度溶液，测定其对ABTS自由基和DPPH自由基的清除能力。

制备得到的蓝莓叶多酚呈深黄色粉末状，该样品对ABTS自由基和DPPH自由基均具有较好的清除能力，并呈现出明显的剂量依赖关系。蓝莓叶多酚对ABTS自由基和DPPH自由基的半抑制浓度分别为90.33和7.37μg/mL。

优选的，步骤1)，粉碎成粉末后过40-50目筛；

优选的，步骤2)，乙醇水溶液浓度为60％，料液比为1∶30；

优选的，步骤2)，超声时间为20-25min，温度为30℃，超声波功率为500W，频率40kHz；

优选的，步骤4)，离心力为4000-5000g，离心时间为15-20min；

优选的，步骤7)，溶液浓度为2.5-3mg/mL，酸化后pH为2-3；

优选的，步骤8)，大孔树脂柱填料可以选择为HPD 400型大孔树脂，径高比为1∶8-1∶10；

优选的，步骤8)，以3-4BV(树脂床体积)/h吸附速率吸附在大孔树脂柱上，上样量为2-2.5BV；

优选的，步骤8)，将吸附好的树脂先用4-6BV的去离子水以1-2BV/h的流速洗净树脂，再用2-3BV 40-60％浓度乙醇溶液进行洗脱，洗脱流速为0.5-1BV/h。

附图说明

图1为乙醇浓度对蓝莓叶多酚提取率的影响图；

图2为料液比对蓝莓叶多酚提取率的影响图；

图3为大孔树脂类型对蓝莓叶多酚吸附率(a)与解析率(b)的影响图；

图4为蓝莓叶多酚提取物、蓝莓叶多酚以及芦丁对ABTS自由基清除作用分析图；

图5为蓝莓叶多酚提取物、蓝莓叶多酚以及芦丁对DPPH自由基清除作用分析图；

具体实施方式