[发明专利]表面锚定的FC‑诱饵抗体展示系统

权利要求书

1.一种用于测定抗体或其抗原结合片段是否与抗原特异性结合的方法，其包括使抗体展示系统与所述抗原接触；其中所述抗体展示系统包含：

(a)分离的真核宿主细胞，其包含编码融合至轻链恒定结构域的所述抗体或抗原结合片段的免疫球蛋白轻链可变区的多核苷酸；编码包含融合至表面锚定多肽的重Fc免疫球蛋白结构域的诱饵的多核苷酸；和编码融合至Fc的所述抗体或抗原结合片段的免疫球蛋白重链可变区的多核苷酸；其中在表达每种所述多核苷酸编码的多肽的条件下培养所述宿主细胞；

(b)包含融合至所述真核宿主细胞表面上的表面锚定多肽或其功能片段的Fc免疫球蛋白结构域或其功能片段的诱饵；和

(c)与宿主细胞表面上的所述诱饵的Fc部分复合的，包含所述免疫球蛋白重链和免疫球蛋白轻链的Fc/抗原结合片段；

并且测定所述Fc/抗原结合片段是否与所述抗原特异性结合；

其中所述编码诱饵的多核苷酸与可调节的启动子可操作地结合，所述可调节的启动子可被抑制以抑制诱饵表达；

其中如果与宿主细胞表面上的所述诱饵的Fc部分复合的，包含所述免疫球蛋白重链和免疫球蛋白轻链的Fc/抗原结合片段与所述抗原特异性结合，则所述抗体或抗原结合片段被测定为特异性结合所述抗原。

2.一种用于鉴定下述的方法：

(i)与抗原特异性结合的抗体或其抗原结合片段；或

(ii)编码所述抗体或抗原结合片段的免疫球蛋白重链的多核苷酸和/或编码所述抗体或抗原结合片段的免疫球蛋白轻链的多核苷酸；

其包括使抗体展示系统与所述抗原接触，其中所述抗体展示系统包含：

(a)分离的真核宿主细胞，其包含编码融合至轻链恒定结构域的所述抗体或抗原结合片段的免疫球蛋白轻链可变区的多核苷酸；编码包含融合至表面锚定多肽的重Fc免疫球蛋白结构域的诱饵的多核苷酸；和编码融合至Fc的所述抗体或抗原结合片段的免疫球蛋白重链可变区的多核苷酸；其中在表达每种所述多核苷酸编码的多肽的条件下培养所述宿主细胞；

(b)包含融合至所述真核宿主细胞表面上的表面锚定多肽或其功能片段的Fc免疫球蛋白结构域或其功能片段的诱饵；和

(c)与宿主细胞表面上的诱饵的Fc部分复合的，包含所述免疫球蛋白重链和免疫球蛋白轻链的Fc/抗原结合片段；

并且测定所述Fc/抗原结合片段是否与所述抗原特异性结合；

其中所述编码诱饵的多核苷酸与可调节的启动子可操作地结合，所述可调节的启动子可被抑制以抑制诱饵表达；

其中如果观察到与宿主细胞表面上的所述诱饵的Fc部分复合的，包含所述免疫球蛋白重链和免疫球蛋白轻链的Fc/抗原结合片段与所述抗原的特异性结合，则鉴定所述抗体或抗原结合片段或多核苷酸。

3.权利要求2的方法，其还包括分离所鉴定的多核苷酸。

4.权利要求1-3中任一项的方法，其还包括抑制所述诱饵的表达，随后测定所述鉴定的抗体或其抗原结合片段对于所述抗原的亲和力。

5.权利要求1-4中任一项的方法，其还包括重组表达由所述多核苷酸编码的免疫球蛋白链，和任选分离包含所述免疫球蛋白的抗体或其抗原结合片段，和任选产生包含组合所述抗体或其抗原结合片段和药学可接受的载体的药物制剂。

6.一种用于制备包含下述的抗体展示系统的方法：

(a)分离的真核宿主细胞；

(b)包含融合至表面锚定多肽的人Fc免疫球蛋白结构域的诱饵；

(c)编码融合至轻链恒定结构域的免疫球蛋白轻链可变区的一种或多种多核苷酸；

(d)编码融合至Fc的免疫球蛋白重链可变区的一种或多种多核苷酸；

所述方法包括将编码所述诱饵的多核苷酸，编码免疫球蛋白轻链的所述一种或多种多核苷酸；和编码免疫球蛋白重链的所述一种或多种多核苷酸引入所述真核宿主细胞内；

其中所述编码诱饵的多核苷酸与可调节的启动子可操作地结合，所述可调节的启动子可被抑制以抑制诱饵表达。