[发明专利]一种鸡毒支原体高密度发酵培养工艺

说明书

本发明公开了一种鸡毒支原体高密度发酵培养工艺，属于农业微生物领域，依次通过鸡毒支原体培养基复苏冻干菌种、种子扩大培养、发酵培养得到鸡滑液囊支原体发酵高密度抗原。本发明通过发酵过程中添加鸡毒支原体培养基，调节PH，进行工业放大生产，为鸡毒支原体提供了充分的营养成分，降低了生产成本，抗原含量高，适于规模应用，具有广阔前景。

技术领域

本发明涉及一种鸡毒支原体高密度发酵培养工艺，属于农业微生物领域。

背景技术

鸡毒支原体MG是鸡慢性呼吸道病CRD的病原，且感染率很高，CRD可通过水平和垂直方式传播并在鸡群中长期存在和蔓延，鸡场感染MG后，雏鸡的弱雏率升高，蛋鸡的产蛋率、肉鸡的体重及饲料转化率均下降，对养鸡业的发展造成严重危害，目前，各鸡场对鸡毒支原体的治疗主要是使用抗生素，而鸡毒支原体易产生耐药性，效果也不理想，免疫疫苗是控制鸡毒支原体病的最好措施，然而，鸡毒支原体的高密度培养非常困难，例如对营养需求高，尤其是对PH要求严格，现有技术中，常用的培养基为改良Frey氏培养基，但是并不能满足大规模的培养。

发明内容

本发明的主要目的是为了提供一种鸡毒支原体高密度发酵培养工艺，用于解决鸡毒支原体难以大规模生产的问题，能够提高发酵终点的活菌密度，提高菌株的免疫原性，提高疫苗的保护效果。

本发明的目的可以通过采用如下技术方案达到：

一种鸡毒支原体高密度发酵培养工艺，包括如下步骤：

步骤1：取冻干的鸡毒支原体生产用种子接种于鸡毒支原体培养基中培养，获得培养液，以同样方法将获得的培养液再接种传代1次；

步骤2：将上述传代后的菌液接种于发酵罐的灭菌鸡毒支原体培养基中，培养过程中，在线流加NaOH溶液控制PH值，添加鸡毒支原体培养，待PH值下降至6.4～6.6时，停止发酵，得到菌液，得到鸡毒支原体发酵高密度抗原。

进一步的，所述步骤1中，取冻干的鸡毒支原体生产用种子按1:10的比例接种于鸡毒支原体培养基中，在36～37℃的条件下，培养18～24h，获得培养液，以同样方法将获得的培养液按1:10的比例再接种传代1次。

进一步的，所述步骤2中，将上述传代后的菌液按1％～5％/V/V的比例接种于20L发酵罐的灭菌鸡毒支原体培养基中，发酵罐的培养工艺条件为：温度为35～38℃，罐压为0.03～0.1Mpa，溶氧为30～60％，PH值为7.6～7.8，搅拌速度为80～160rpm。

进一步的，所述步骤2中，培养过程中，在线流加20％NaOH溶液控制PH值至7.2时，添加鸡毒支原体培养基为原培养体积的30％，培养48h，停止在线流加20％NaOH溶液，待PH值下降至6.4～6.6时，停止发酵。

进一步的，还包括步骤3：将所述步骤2中发酵后得到的菌液以1％～5％V/V的比例接种于体积大于20L的发酵罐中进行扩大培养。

进一步的，所述扩大培养所用发酵罐的体积为200L～1500L。

进一步的，所述步骤3中，扩大培养的条件包括：温度为35～38℃，罐压为0.03～0.1Mpa，溶氧为30～60％，PH值为7.6～7.8，搅拌速度为80～160rpm。

进一步的，每升所述鸡毒支原体培养基按如下成分配制：

进一步的，所述鸡毒支原体培养基在121℃温度条件下，高压灭菌15min，在4℃温度条件下保存。

进一步的，所述鸡毒支原体培养基在培养时，再加150～200ml猪血清和1000单位/ml青霉素，加20％NaOH溶液调pH值至7.6～7.8。