[发明专利]一种分离分析大体积环境水样中微量孔雀绿的方法

说明书

本发明公开了一种分离分析大体积环境水样中微量孔雀绿的方法。采用高内相乳液聚合技术合成具有亲水性的聚苯乙烯STY‑二乙烯苯DVB‑甲基丙烯酸缩水甘油酯GMA高内相乳液聚合整体柱，即STY/DVB/GMA polyHIPE整体柱，其中STY、DVB、GMA和表面活性剂Span80的体积比为6:3:3:4，水相体积占水相和有机相总体积的比为90~92%；混合液在蠕动泵或高压泵的作用下以2mL/min的流速通过STY/DVB/GMA polyHIPE整体柱，萃取并富集环境水样品中存在的痕量还原型孔雀绿，采用体积比为1:4的PBS/乙腈混合溶液清洗STY/DVB/GMA polyHIPE整体柱，除去吸附力小的干扰物质，再用体积比为1:1的乙醇/三氯甲烷混合溶液洗脱富集在STY/DVB/GMA polyHIPE整体柱上的孔雀绿，收集洗脱液，用高效液相色谱‑荧光光谱联用分析测定，即实现对大体积环境水样中微量孔雀绿的分离分析。

技术领域

本发明属于环境样品痕量目标物分离分析技术领域，特别涉及一种分离分析大体积环境水样中微量孔雀绿的方法。该方法将高内相乳液聚合物整体柱与高效液相色谱联用，适用于环境水样及其他复杂基体中痕量孔雀绿目标物的萃取、富集、分离和检测。

背景技术

孔雀绿(MG)，化学名称为四甲基代二氨基三苯甲烷，化学式为C₂₃H₂₅ClN₂,别名碱性孔雀(石)绿、碱性绿、盐基块绿、苯胺绿等，为翠绿色有光泽的结晶，属三苯甲烷类染料。MG常被用于制陶业、纺织业、皮革业、食品颜色剂和细胞化学染色剂，因其能有效预防水产品真菌感染和杀死寄生虫，1933年起作为驱虫剂、杀虫剂、防腐剂在水产中使用，后曾被广泛用于预防与治疗各类水产动物的水霉病、鳃霉病和小瓜虫病等。从上世纪90年代开始，国内外学者陆续发现孔雀绿能引起鱼类的鳃和皮肤上皮细胞轻度炎症；使肾管腔有轻度扩张，肾小管壁细胞的胞核也扩大；具有致突变、致畸、致癌等危害。MG进入环境以后，经过水的稀释作用，多以痕量和超痕量存在，因此建立水体中MG的检测方法是很有必要。

目前，MG的检测方法主要有高效液相色谱法-紫外检测法，高效液相色谱-安培法、高效液相色谱法-质谱联用法、酶联免疫法毛细管电泳法等。高效液相色谱法紫外检测，MG的响应相对较低；利用MG能被硼氢化钾还原为隐色孔雀石绿(LMG)，LMG具有荧光响应的特点，采用高效液相色谱法-荧光检测法进行分析检测，有助于提高MG残留检测的灵敏度。

固相萃取(Solid Phase Extraction，SPE)是一个由柱色谱分离过程、分离机理、固定相和溶剂的选择等组成的试样预处理技术，其利用固体吸附剂吸附液体样品中的目标物，使目标物与样品的基体和干扰化合物分离，然后再用洗脱液洗脱，最终达到分离和富集目标物的目的。SPE具有操作时间短、样品量小、不需萃取溶剂、适于分析挥发性与非挥发性物质、重现性好等优点.对环境化学、食品、医药卫生、临床化学、生物化学、法医学等领域中复杂目标物样品微量或痕量的分离、富集和分析做出了巨大的贡献。

高内相乳液(High Internal Phase Emulsion(HIPE))，是一种水包油(O/W)或油包水(W/O)两相体系，其中分散相的体积分率在74％以上，甚至达到99％。制备高内相乳液整体柱的过程中，可通过改变乳液材料的单体种类、单体种类、乳液材料的相比等精确控制孔的大小和分布，且高内相乳液整体柱具有高孔隙率、高比表面积、低密度、很好的物质输送能力以及重现性好的特点，在分离介质、吸收材料、生物组织工程、催化剂载体等领域显示出较好的应用前景。

发明内容

本发明的目的在于，克服现有技术中有机聚合物整体柱材料在种类和萃取效果上的很多不足，提供一种分离分析大体积环境水样中微量孔雀绿的方法。

具体步骤为：

(1)采用高内相乳液聚合技术合成具有亲水性的聚苯乙烯STY-二乙烯苯DVB-甲基丙烯酸缩水甘油酯GMA高内相乳液聚合整体柱，即STY/DVB/GMApolyHIPE整体柱。