[发明专利]一种1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶的单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种1‑氨基环丙烷‑1‑羧酸氧化酶的单克隆抗体，所述的单克隆抗体的重链可变区序列包含SEQ ID NO.2、4和6所示的CDR的氨基酸序列；和轻链可变区序列包含SEQ ID NO.9、11和13所示的CDR的氨基酸序列。本发明以该酶的多肽为免疫原，免疫小鼠得到淋巴细胞，并利用杂交瘤细胞融合技术制得融合细胞，得到能产生高亲和性和高特异性检测识别该酶的细胞株。本发明可用于检测果实不同发育阶段1‑氨基环丙烷‑1‑羧酸氧化酶的含量变化；和本发明的单克隆抗体提供了一个靶向蛋白研究的工具，使得对不同植物类型、不同品系或不同发育时期的蛋白表达变化及蛋白网络图谱的更深层次研究得以实现。

技术领域

本发明属于单克隆抗体生物技术领域，特别涉及一种1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶的单克隆抗体及其应用。

背景技术

1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶是由ACO基因编码的一种非血红素铁酶(Zhang Z,Schofield CJ,Baldwin JE,Thomas P,John P.Biochem.J.307:77–85)，这种酶属于氧化还原酶家族，广泛存在于植物中，特别是果实。1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶是催化乙烯合成的限速酶，起到调控果实的发育和成熟的作用(Pirrung MC,Kaiser LM,Chen JBiochemistry.32(29):7445–50)。

目前市面上并没有专门针对果实成熟研究的1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶的靶向抗体，因此，在蛋白组学层面上，对于该研究领域缺乏有效的抗体工具，用于不同植物类型、不同品系或不同发育时期该酶表达能力水平的研究。

发明内容

本发明提供一种1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶的单克隆抗体及其应用，以解决现有技术存在的上述缺陷，本发明通过提供一个靶向蛋白研究的工具，使得对不同植物类型、不同品系或不同发育时期的蛋白表达变化及蛋白网络图谱的更深层次研究得以实现。

本发明的技术方案如下：

本发明合成1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶多肽，即四组‘NYPPCPNPEL’‘GGLILLFQDD’‘HSIVINLGDQ’和‘SVEHRVIAQT’，分别以其作为免疫原，免疫小鼠得到淋巴细胞，并利用杂交瘤细胞融合技术制得融合细胞，经免疫印迹法、有限稀释法和ELISA法，得到能够产物高亲和性和高特异性的单克隆抗体的细胞株，及由该细胞株分泌的单克隆抗体，并经免疫酶联，蛋白印记，免疫共沉淀加质谱和抗体芯片检测等验证，确定最有效抗体。

一种1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶的单克隆抗体，所述的单克隆抗体的重链可变区序列包含SEQ ID NO.2所示的CDR1的氨基酸序列、SEQ ID NO.4所示的CDR2的氨基酸序列和SEQ ID NO.6所示的CDR3的氨基酸序列；和轻链可变区序列包含SEQ ID NO.9所示的CDR1的氨基酸序列、SEQ ID NO.11所示的CDR2的氨基酸序列和SEQ ID NO.13所示的CDR3的氨基酸序列。

优选为，所述的重链可变区序列的框架区依次包含SEQ ID NO.1、3、5和7所示的氨基酸序列，和所述的轻链可变区序列的框架区依次包含SEQ ID NO.8、10、12和14所示的氨基酸序列。

本发明还公开了上述1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶的单克隆抗体在检测1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶上的应用，包括用于检测果实不同发育阶段1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶的含量变化。

与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

本发明的一种1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶的单克隆抗体，对1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶具有高亲和力和高特异性，能广泛地用于对1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶检测上，特别可用于检测果实不同发育阶段1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶的含量变化；此外，本发明的单克隆抗体提供了一个靶向蛋白研究的工具，使得对不同植物类型、不同品系或不同发育时期的蛋白表达变化及蛋白网络图谱的更深层次研究得以实现。