[发明专利]一种检测新生仔猪常见垂直传播病原的采样方法及检测方法

权利要求书

1.一种检测新生仔猪常见垂直传播病原的采样方法，其特征在于，包括通过胎衣、脐带血、扁桃体、血液、鼻拭子、喉拭子和肛拭子对垂直传播病原的采样。

2.根据权利要求1所述的一种检测新生仔猪常见垂直传播病原的采样方法，其特征在于，所述通过胎衣采样的步骤包括：用无菌剪刀在不同部位剪5块1-2cm2大小面积的胎衣，置于无菌离心管中；所述通过脐带血采样的步骤包括：取仔猪脐带，在中段剪开，将脐带血挤入无菌干燥的青霉素瓶中，3～5滴，作为待检样品；所述通过扁桃体采样的步骤包括：利用扁桃体采样器进行采集，具体为首先固定活猪的上唇，用开口器打开口腔，用采样枪采取扁桃体样品，用灭菌牙签挑至无菌离心管中并作标记；所述通过血液采样的步骤包括：将猪面朝上固定，全身成一直线，前肢上抬，在两侧第一对肋骨与胸骨结合处的前方会出现左右两个明显的凹陷窝，将皮肤消毒，将注射器向右侧凹陷窝处由上而下，稍偏向中央及胸腔方向刺入，见有回血，即可采血，将血液以3000r/min离心10分钟，取血清作为待检样品。

3.根据权利要求2所述的一种检测新生仔猪常见垂直传播病原的采样方法，其特征在于，所述通过鼻拭子采样的步骤包括：将无菌拭子用无菌生理盐水湿润后，插入仔猪鼻腔中，沿鼻腔壁轻轻转动3～5圈，投入无菌离心管中，折断拭杆，使其完全置于管中，盖紧管盖；所述通过喉拭子采样的步骤包括：将无菌拭子用无菌生理盐水湿润后，插入仔猪咽部，转动3～5圈，投入无菌离心管中，折断拭杆，使其完全置于管中，盖紧管盖；所述通过肛拭子采样的步骤包括：将无菌拭子用无菌生理盐水湿润后，插入仔猪肛门，转动3～5圈，投入无菌离心管中，折断拭杆，使其完全置于管中，盖紧管盖。

4.根据权利要求3所述的一种检测新生仔猪常见垂直传播病原的采样方法，其特征在于，所述扁桃体采样方法可用于检测猪瘟病毒；所述脐带血采样方法可用于检测猪细小病毒或猪圆环病毒2型或弓形虫；所述血液采样方法可用于检测猪圆环病毒2型或猪繁殖与呼吸综合征病毒；所述鼻拭子、喉拭子采样方法可用于检测猪伪狂犬病毒或猪支原体病毒或猪衣原体；所述胎衣采样方法可用于检测日本乙型脑炎病毒或猪细小病毒；所述肛拭子采样方法可用于检测猪传染性胃肠炎病毒或流行性腹泻病毒。

5.一种检测新生仔猪常见垂直传播病原的检测方法，其特征在于，包括猪瘟病毒的检测、猪细小病毒的检测、猪圆环病毒2型的检测、猪伪狂犬病毒的检测、猪繁殖与呼吸综合征病毒的检测、日本乙型脑炎病毒的检测、流行性腹泻病毒的检测、猪传染性胃肠炎病毒的检测、猪支原体的检测、猪衣原体的检测、弓形虫的检测。

6.根据权利要求5所述的一种检测新生仔猪常见垂直传播病原的检测方法，其特征在于，所述猪瘟病毒的检测方法包括：取采集的扁桃体，剪碎匀浆，取匀浆液提取病毒RNA，并反转录为cDNA，进行PCR扩增，扩增引物为：

F 5'-AAACGGAGGGACTAGCCAT-3'

R 5'-TGCCATACAGCAGAGA-3'

目的条带为252bp，扩增程序为：95℃5min，95℃30s，55℃30s，72℃30s，35个循环，72℃10min。

7.根据权利要求5所述的一种检测新生仔猪常见垂直传播病原的检测方法，其特征在于，所述猪细小病毒的检测方法包括：取采集的脐带血或将胎衣剪碎匀浆，提取病毒DNA，进行PCR扩增，扩增引物为：

F 5'-ATACAATTCTATTTCATGGGCCAGC-3'

R 5'-TATGTTCTGGTCTTTCCTCGCATC-3'

目的片段为330bp，扩增程序为：95℃5min，95℃30s，62℃30s，72℃30s，35个循环，72℃10min；

所述猪圆环病毒2型的检测方法包括：取采集的血清或脐带血，提取病毒DNA，进行PCR扩增，扩增引物为：

F 5'-GGATATTGTAGTCCTGGTCG-3'

R 5'-TCCCGCACCTTCGGATATAC-3'

目的片段为360bp，扩增程序为：95℃5min，95℃30s，58℃30s，72℃30s，35个循环，72℃10min。