[发明专利]磁固相微萃取结合碳量子点荧光增敏检测牛奶中氧氟沙星方法

说明书

本发明公开了一种磁固相微萃取结合碳量子点荧光增敏检测牛奶中氧氟沙星的方法，采用聚乙烯亚胺为碳源及氮源，水热法合成氮掺杂荧光碳量子点；采用2‑(5‑溴‑吡碇偶氮)‑5‑二乙氨基苯酚及十二烷基硫酸钠修饰的四氧化三铁磁性纳米粒子为净化牛奶材料，氧氟沙星能增强氮掺杂荧光碳量子点的荧光，其增强的荧光信号强度与氧氟沙星浓度呈一定线性关系，据此建立了检测氧氟沙星的荧光分光光度法；本发明制备的氮掺杂荧光碳量子点对氧氟沙星有显著的荧光增敏作用，且选择性强，磁性纳米粒子有较好的净化作用，消除基体的干扰，方法用于氧氟沙星的荧光测定，具有灵敏度高、特异性的特点。

技术领域

本发明涉及化学分析检测技术领域，具体为一种磁固相微萃取结合碳量子点荧光增敏检测牛奶中氧氟沙星方法。

背景技术

氧氟沙星是一种人工合成喹诺酮类广谱抗生素，在乳制品业被广泛应用于治疗奶牛乳腺炎，其残留会对人类健康产生严重威胁，如过敏反应和体内产生抗药性菌种等。因此我国及其他一些国家对乳制品中氧氟沙星等抗生素残留量制定了严格的控制标准。传统的抗生素残留测定方法如ELISA、色谱等方法，需要对牛奶基质进行复杂的样品前处理。荧光法具有操作简单、快速、灵敏度高的特点，但由于复杂基体带来的干扰不可避免，对测定结果有较大影响。

碳量子点是一类粒径一般小于10nm的新型碳材料。它具有优异的光学性能，可调的激发和发射行为，较高的荧光稳定性，较低的毒性和良好的生物相容性，在越来越多的领域中得到了广泛的应用，逐渐成为纳米碳材料中的一颗新星。目前，人们致力于探索制备高量子产率碳点的方法。碳量子点经过掺杂或者表面钝化后,其荧光量子产率以及光电性能均可以得到明显的提高。最近几年，有很多关于氮元素掺杂碳量子点的文献报道，碳量子点的荧光量子产率均得到了提高，未见与本发明方法相同的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高灵敏、高选择性的磁固相微萃取结合碳量子点荧光增敏检测牛奶中氧氟沙星的方法。

本发明利用聚乙烯亚胺制备水溶性氮掺杂荧光碳量子点，制备的氮掺杂碳量子点的荧光量子产率高达39%，其对氧氟沙星有显著的荧光增敏作用，用于牛奶中氧氟沙星残留测定时，将合成的2-(5-溴-吡啶偶氮)-5-二乙氨基苯酚及十二烷基硫酸钠修饰的Fe₃O₄纳米粒子用于磁固相微萃取，对干扰测定的牛奶基体有明显的净化效果，方法利用了氮掺杂碳量子点对氧氟沙星的特异性荧光增敏，同时对基体的净化与常用的固相萃取及柱层析相比，具有成本低、分离速度快、净化效果好的优势。建立了氮掺杂荧光碳量子点作为荧光探针检测微量氧氟沙星的新方法，方法的灵敏度高，检测限可以达到0.5nmol/L，荧光增敏倍数达13倍，同时其他喹诺酮药物没有此作用，方法具有较好的特异性。

本发明磁固相微萃取结合碳量子点荧光增敏检测牛奶中氧氟沙星方法包括如下步骤：

(1)标准工作曲线的绘制：采用柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液配置8个浓度在0.01～10 µmol/L范围内的氧氟沙星标准溶液，每个标准溶液5mL，然后加入水溶性氮掺杂荧光碳量子点溶液，涡旋混匀静置后，于荧光分光光度计上，激发波长为344nm，发射波长为423nm测定荧光强度，以荧光增强强度对其相应浓度作图进行回归分析，即可得到标准工作曲线，由此可得到氧氟沙星的线性回归方程与其相关系数；

(2)样品制备：取5-10mL牛奶，加入10-15mL甲醇-水-甲酸提取液、l-3mL质量浓度的4％三氯乙酸乙腈溶液，涡旋1-3 min，超声5-10min，10000r/min下离心5-10 min，取上清液，避光保存于4℃冰箱待分析测定，其中甲醇-水-甲酸提取液是按体积比28:72:0.1的比例将甲醇、水、甲酸混匀制得；