[发明专利]一种桉树良种尾赤桉DH191‑7的组培快繁方法

权利要求书

1.一种桉树良种尾赤桉DH191-7的组培快繁方法，其特征在于：采用广西壮族自治区林木品种审定委员会审定的桉树良种尾赤桉DH191-7无性系原株，伐倒促萌后，以萌芽条带潜伏芽的茎段作为外殖体，离体诱导无菌芽，由茎段直接萌生侧芽，无菌芽经继代增殖培养、生根培养和生根苗移栽环节后，获得再生植株。

2.根据权利要求1所述的桉树良种尾赤桉DH191-7的组培快繁方法，其特征在于：所述方法具体步骤如下：

（1）在桉树良种尾赤桉DH191-7无性系试验林中，选出优树原株；

（2）将DH191-7优树原株在离地面10-15cm高度处伐倒，促萌芽，当萌芽条长至10-15cm时，剪取萌芽条，用水浸泡基部，带回实验室备用；

（3）萌芽条修剪去叶片，用自来水流水冲洗30min，再用饱和洗衣粉溶液洗涤10min，用纯净水清洗干净；

（4）在超净工作台上，将萌芽条剪去嫩梢段和基部老化部分，切取长2-3cm，保留有1-2个潜伏芽的切段做表面灭活材料；

（5）将待灭活材料置于高压灭菌处理过的无菌瓶中，用体积分数为75%的酒精溶液浸泡15-17s，无菌水清洗3-5次，洗去残留酒精，再用质量分数为0.1%HgCL₂溶液浸泡，并适当搅拌，7-9min后倒去HgCL₂溶液至专用收集罐中，用无菌水清洗材料5-6次，洗去残留在材料表面的HgCL₂溶液；

（6）用灭菌后的镊子夹取清洗好的茎段，放置在灭菌的接种碟上，用无菌滤纸吸干附着在材料表面水分后，切去叶柄和茎段的两端，接种到无菌芽诱导培养基上，每瓶接种一支外植体，全暗培养8-12d，温度26±2℃，腋芽开始萌动并不断生长，转入光照条件下培养15-20d，光照时间12h/d，光照强度1500-2000lux，培养温度26±2℃；

（7）选取没有污染的无菌芽，切割后转入继代增殖培养基上培养18-23天；培养条件：温度26±2℃，光照强度2000-2500lux；

（8）选取芽苗长2-3cm，并有3-4个节的继代芽苗，切成长1.5-1.8cm的单芽，插入生根培养基上培养，每瓶接种25株，培养条件：温度28-30℃，光照强度1200-1500lux；培养6-10天后，待切口冒出短根或根点，出根率达到60%时，移瓶至温度28-35℃，光照强度3000-5000lux的自然光下继续培养15-20天；待生根瓶苗高达3.0-4.5cm，叶片4-6对，根系发达，主侧根明显时培养结束；

（9）选取根系发达的生根瓶苗，洗去根部粘附的琼脂，移栽至用KMnO₄消毒过的黄心土和蛭石做基质的营养杯或轻基质育苗杯上，培养60-80d，得到苗高20-25cm，地径0.3-0.4cm的再生植株；所述黄心土和蛭石比例为5:1。

3.根据权利要求1-2任一项所述的桉树良种尾赤桉DH191-7的组培快繁方法，其特征在于：所述的桉树良种尾赤桉DH191-7是由东门林场培育，经广西壮族自治区林木品种审定委员会审定的尾叶桉×赤桉（E.urophylla ×E.camaldulensis）杂种子代的优良单株繁育的无性系，性状为：速生丰产性和耐寒性。

4.根据权利要求2所述的桉树良种尾赤桉DH191-7的组培快繁方法，其特征在于：所述步骤（6）中的无菌芽诱导培养基组成为：改良MS+N⁶苄基腺嘌呤（6-BA)1.0mg/L+萘乙酸（NAA）0.2-0.4mg/L+维生素C(Vc)2.0 mg/L+核黄素(维生素B₂)7.0 mg/L+半胱氨酸5.0g/L+蔗糖30g/L+琼脂4.0g/L，pH 6.0-6.2。

5.根据权利要求2所述的桉树良种尾赤桉DH191-7的组培快繁方法，其特征在于：所述步骤（7）中的继代增殖培养基组成为：改良MS+N⁶苄基腺嘌呤（6-BA)0.3-0.5mg/L+萘乙酸(NAA)0.1-0.15mg/L+核黄素(维生素B2)7.0 mg/L+维生素C 2.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂4.0g/L，pH 5.8-6.0。

6.根据权利要求2所述的桉树良种尾赤桉DH191-7的组培快繁方法，其特征在于：所述步骤（8）中的生根培养基为：1/2改良MS+ABT₁0.6mg/L+IBA 0.1mg/L+蔗糖15g/L+琼脂4.2mg/L，pH 6.0-6.4。