[发明专利]丹参组织培养中愈伤分化生芽培养工艺

权利要求书

1.丹参组织培养中愈伤分化生芽培养工艺，其特征在于，包括以下步骤：

1)培养基的配制

a、激素母液的配制：称取6-BA 0.1g，用5mL 1M NaOH引溶，再用纯水定容至100mL，即为浓度为1.0mg/mL的6-BA母液；

b、激素抽滤灭菌：将滤膜放进抽滤头，高压灭菌，带进超净台，将IBA母液抽滤灭菌，备用；

c、配制培养基基本成分：MS+30g/L蔗糖+5.26g/L琼脂，pH5.8；高压灭菌；带入超净台备用；

d、添加激素：在超净台上用无菌的移液抢吸取6-BA加入到基本培养基里，使其浓度为1.5mg/L，混匀；

e、分装：将添加好激素的培养基分装到无菌的组培瓶中，每瓶30～40mL，成分为：MS+1.5mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+5.26g/L琼脂，pH5.8；

2)外植体的选择和培养：以丹参叶片为外植体，消毒后，切成0.5*0.5cm大小置于愈伤培养基中培养；

3)愈伤的选择：外植体诱导愈伤28-30天，选择有光泽的愈伤；

4)愈伤的处理；

5)愈伤的接种；

6)丛芽的诱导：接种后的愈伤放置于组培室的组培架上进行丛芽的诱导，培养条件：培养温度27±0.5℃，光照时间12h，光强3000Lx，T5植物培养灯管。

2.根据权利要求1所述的丹参组织培养中愈伤分化生芽培养工艺，其特征在于：所述步骤(2)“外植体的选择和培养”培养条件：培养温度(27±0.5℃)，光照时间12h，光强3000Lx，T5植物培养灯管。

3.根据权利要求1所述的丹参组织培养中愈伤分化生芽培养工艺，其特征在于：所述步骤(3)“愈伤的选择”选择生长旺盛，绿色或黄绿色有光泽的愈伤带入超净台备用，并用75％酒精棉球擦拭瓶口处。

4.根据权利要求1所述的丹参组织培养中愈伤分化生芽培养工艺，其特征在于：所述步骤(4)“愈伤的处理”是用无菌的镊子将生长良好的愈伤从组培瓶里镊起，置于无菌的接种盘上，用无菌的剪刀或解剖刀去除愈伤中褐化部分，将生长良好的部分切成0.5cm×0.5cm大小。

5.根据权利要求1所述的丹参组织培养中愈伤分化生芽培养工艺，其特征在于：所述步骤(5)“愈伤的接种”是用无菌的镊子将0.5cm×0.5cm愈伤镊起，放置于MS固体培养基上，培养基成分为MS+1.5mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+5.26g/L琼脂，pH5.8，高压灭菌。