[发明专利]检测远志中tenuifoliside C含量的方法

说明书

本发明公开一种检测远志药材中tenuifoliside C含量的PCR引物及方法，该PCR引物为：上游引物：5’‑ATGCCTATGCTTGTGCC‑3’；下游引物：5’‑TAGTGGGTGTTGCGTCT‑3’。该方法包括：提取远志样品的基因组DNA；以基因组DNA为模板，利用该特异性引物进行PCR扩增；通过PCR扩增产物检测其所含化合物tenuifoliside C的含量，能扩增出长度为654bp条带的远志样品，其所含化合物tenuifoliside C的含量较低。本发明所述PCR引物及方法，具有方便快捷、准确性高的优点，可在远志药材的良种选育中应用，可大大缩短育种时间，提高育种效率。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，尤其涉及一种检测远志药材中化合物tenuifoliside C含量的PCR引物及方法。

背景技术

远志(Polygala tenuifolia Willd.)始载于《神农本草经》，列为上品，且为常用中药。性温，味苦、辛，具有安神益智、祛痰消肿等功效。经现代研究发现，远志药材的主要有效成分包括皂苷类、糖酯类、口山酮类及生物碱类等，具有抑菌、抗炎、提高认知、改善记忆能力、抗老年痴呆、抗抑郁、抗肿瘤、抗衰老等药理作用。

中药材药效的强弱与药材质量的优劣密切相关，而药材质量的优劣与药材中所含主要化学成分含量的高低紧密相关。中药材中次生代谢物的累积程度及含量变化又受生长年限的影响，中药材尤其是根茎类中药材，生长年限较长，一般以2-3年生为主，测定中药材中所含化合物的含量，需要很长时间。

目前中药材中化合物的定性及定量分析通常采用以下几个途径：(1)购买相关标准品，与样品中的组分进行对比，这一途经的缺点是成本很高而且不一定能找到所有相关的标准物；(2)采用各种分离制备手段对组分进行分离纯化，缺点是具有极大的盲目性，耗时长，同时还不可避免的涉及到大量的重复性工作；(3)通过查文献来寻找相关化合物，但过去的文献报道采用的数据往往采自低分辨率仪器，存在不少假阳性结果。

化合物含量是多基因控制的复杂性状，不同远志样品间化合物含量差异较大。研究表明，远志糖酯类化合物具有抗痴呆和脑保护活性，本发明选取远志中含量相对较高且具有镇静安神作用的tenuifoliside C作为研究对象，筛选出与tenuifoliside C含量相关的特异性DNA分子条带，目的是针对该特异性条带设计出可检测tenuifoliside C含量的特异性PCR引物，并希望得到实际应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测远志药材中tenuifoliside C含量的PCR引物；以及利用该PCR引物检测远志药材中tenuifoliside C含量的方法。该方法不仅可用于远志药材中tenuifoliside C含量的检测，而且具有方便快捷、准确性好的优点，可在远志药材的良种选育中应用，可大大缩短育种时间，提高育种效率。

本发明提供的一种检测远志药材中tenuifoliside C含量的PCR引物，该特异性PCR引物如下所示：

上游引物：5’-ATGCCTATGCTTGTGCC-3’(SEQ ID No.1)；

下游引物：5’-TAGTGGGTGTTGCGTCT-3’(SEQ ID No.2)。

本发明提供的一种检测远志药材中tenuifoliside C含量的方法，包括如下步骤：

(1)提取远志样品的基因组DNA；

具体为采用CTAB法提取基因组DNA；由于各个发育时期的个体、各个组织器官甚至细胞的DNA保持一致，不受环境的影响且遗传稳定，故可选取任意生长时期、任意组织部位的远志样品提取DNA。

(2)以所述基因组DNA为模板，利用所述的PCR引物进行PCR扩增；