[发明专利]一种利用硝化反应检测单羟酚类衍生物的试剂的制备方法

说明书

本发明为一种利用硝化反应检测单羟酚衍生物的试剂的制备方法。所述的单羟酚类衍生物包括酪氨酸、对羟基苯丙氨酸、色氨酸和5‑羟吲哚乙酸等。所述单羟酚类衍生物尿液检测试剂，是包括硝酸、硫酸汞、硝酸镍、醋酐、乙腈组成的水溶液。所述的配置方法包括：A溶液的制备，B溶液的制备，C溶液的制备，D溶液的制备。最后将四个溶液按照一定比例混合，在试剂中加入五倍体积的尿液，观察络合物的颜色，跟标准比色卡对比即可判断是否健康或者患有癌症。本发明提供的技术方案，原材料价格低廉而且易获取，制备过程简单，试剂稳定性好，具有测试准确、灵敏度高和特异性好等特点，检测时反应时间短，结果易于判断。

技术领域

本发明涉及一种检测尿液中单羟酚衍生物的试剂及其制备方法，尤指利用硝酸的硝化反应来检测尿液中单羟酚衍生物的试剂及其制备方法。

背景技术

根据全国肿瘤登记中心发布的《2015中国肿瘤登记年报》显示，我国每年新发肿瘤病例约为429万例，平均每天11753人，每分钟有8人被诊断为癌症。人体所患的恶性肿瘤中，约有75%以上发生在身体易于查出或发现的部位。有效的早诊意识和措施、肿瘤高危人群的筛查、精确诊断设备的应用等，都有助于肿瘤的早发现。世界卫生组织的研究认为：目前1/3的癌症是可以预防的；1/3的癌症可以通过积极治疗而延长患者生命；1/3的癌症是可以通过早期发现、早期诊断、早期治疗而痊愈的。其实，如果能做到“三早”，即早发现、早诊断、早规范化治疗，部分癌症治愈率可以达到90%以上。

单羟酚衍生物是一组氨基酸（酪氨酸、色氨酸）及其代谢产物（对羟基苯丙酮酸，5-羟吲哚乙酸）的总称。研究证实，当人体有癌细胞活动时，细胞的异常增殖引发应激反应引起人体肾上腺皮质激素（单羟酚类物质）分泌增加，肾上腺皮质激素（单羟酚类物质）的增加会抑制人体的免疫功能，从而导致抗癌免疫力下降，同时体内特异氨基酸代谢异常升高，尿液中单羟酚衍生物的含量远远超过正常人。传统的氧化法测定用高浓度的硫酸和硝酸作为溶剂，再加入高浓度的汞离子和亚汞离子，配置过程会产生大量的有毒气体，用户在使用过程中一旦试剂溢出，很容易灼伤皮肤，另外反应产物也不易处理，会给环境带来较大危害，同时由于试剂容易受到尿液中复杂成分的干扰导致假阳性，大大限制了其应用价值。

发明内容

针对上述方法的不足，本发明提供了一种利用硝化反应检测尿液中单羟酚类衍生物的试剂及其制备方法，用以解决试剂配置和用后处理问题和准确性低的问题。

本发明的技术方案是：利用硝化反应，将单羟酚类衍生物的酚羟基进行临位硝化，硝化产物再与二价汞离子发生络合反应，形成红色的络合物。通过引入镍离子，可以消除尿液中其他阴离子的干扰；通过引入醋酐，可以提高硝化反应的效率。如果硝化反应发生在非临位，则会生产黄色络合物，而临位发生硝化，才能生成红色络合物。因此通过引入乙腈，可以提高酚羟基临位硝化的产出比例，进而提高测值的准确性。

反应原理：第一步：单羟酚类衍生物+硝酸→单羟酚临位硝化产物

第二步：单羟酚临位硝化产物+二价汞离子→红色络合物

单羟酚类代谢物尿液检测试剂的制备方法，包括如下步骤：

1.称取硫酸汞溶于质量浓度为5～20%的硝酸水溶液中获得A溶液，硫酸汞含量为50-500g/L；

2.称取硝酸镍溶于质量浓度为5～20%的硝酸水溶液中获得B溶液，硝酸镍含量为30-200g/L；

3.量取一定体积的醋酐溶于双蒸水中获得C溶液，醋酐含量为5-100mL/L；

4.量取一定体积的乙腈溶于双蒸水中获得D溶液，乙腈含量为5-100mL/L；

5.混合：将制备的A、B、C、D溶液按1：(0.5～1.6)：(0.01～0.2)：（0.01～0.2）体积比混合，即得所述单羟酚类衍生物尿液检测试剂。

试剂在室温环境（4℃-40℃）可以保存2年有效，稳定性好。