[发明专利]用于特异性修复人HBB基因突变的碱基编辑系统、方法、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种用于特异性修复人HBB基因突变的碱基编辑系统，其特征在于，包含碱基编辑酶和gRNA，所述碱基编辑酶为融合蛋白，所述融合蛋白包括CRISPR/Cas系统的效应蛋白结构域、胞嘧啶脱氨酶结构域以及尿嘧啶DNA糖基化酶抑制剂结构域。

2.如权利要求1所述用于特异性修复人HBB基因突变的碱基编辑系统，其特征在于，所述gRNA包含15-100个核苷酸，并且还包括与靶DNA序列互补的至少12个连续核苷酸组成的引导序列。

3.如权利要求1或2所述用于特异性修复人HBB基因突变的碱基编辑系统，其特征在于，所述的gRNA的引导序列包括SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.93所示核苷酸序列中的一种或多种。

4.如权利要求1或2所述用于特异性修复人HBB基因突变的碱基编辑系统，其特征在于，所述的gRNA为如下1)或2)中的一种：

1)包括crRNA和tracrRNA，其中，crRNA的部分序列与tracrRNA的部分序列互补、并组成二聚体，其中，crRNA的引导序列包括SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.93所示核苷酸序列中的一种或多种；

2)嵌合型单链sgRNA，其中sgRNA由crRNA与tracrRNA融合而成，sgRNA的引导序列的包括SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.93所示核苷酸序列中的一种或多种。

5.如权利要求1所述用于特异性修复人HBB基因突变的碱基编辑系统，其特征在于，所述碱基编辑酶的氨基酸序列包括与SEQ ID NO.94-105所示氨基酸序列至少80％、85％、90％、92％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％一致的序列。

6.如权利要求1所述用于特异性修复人HBB基因突变的碱基编辑系统，其特征在于，所述的碱基编辑酶融合蛋白中，CRISPR/Cas系统的效应蛋白结构域与胞嘧啶脱氨酶结构域之间还连接有第一连接肽。

7.如权利要求1所述用于特异性修复人HBB基因突变的碱基编辑系统，其特征在于，所述的碱基编辑酶融合蛋白中，所述CRISPR/Cas系统的效应蛋白结构域与尿嘧啶DNA糖基化酶抑制结构域之间还连接有第二连接肽。

8.一种非天然存在的或工程化的组合物，其特征在于，所述组合物为1)-6)中的一种或多种：

1)包含一种或多种载体，该一种或多种载体包含组分I和组分II：

所述组分I包括第一调节元件，以及与所述第一调节元件可操作地连接的编码如权利要求1所述的碱基编辑酶的编码序列；所述组分II包括第二调节元件，以及与所述第二调节元件可操作地连接的编码如权利要求1所述的gRNA的编码序列；其中，组分I和II位于相同或不同载体上；

2)包含如权利要求1所述的碱基编辑酶的mRNA以及载体，所述载体包括第二调节元件，以及与所述第二调节元件可操作地连接的编码如权利要求1所述的gRNA的编码序列；

3)包含如权利要求1所述的碱基编辑酶的蛋白以及载体，所述载体包括第二调节元件，以及与所述第二调节元件可操作地连接的编码如权利要求1所述的gRNA的编码序列；

4)包含如权利要求1所述的碱基编辑酶的表达载体以及如权利要求1所述的gRNA；

5)包含如权利要求1所述的碱基编辑酶的mRNA以及如权利要求1所述的gRNA；

6)包含如权利要求1所述的碱基编辑酶的蛋白以及如权利要求1所述的gRNA。

9.一种用于在体细胞或个体内特异性修复人HBB基因突变的方法，其特征在于，包括：递送如权利要求1所述的碱基编辑系统或如权利要求8所述的组合物，使所述的碱基编辑系统或组合物与人HBB突变基因相关的序列接近，获得经过修复的人HBB基因。

10.一种真核宿主细胞，其特征在于，包含如权利要求1所述的碱基编辑系统或如权利要求8所述的组合物。