[发明专利]用于基因分型检测-α4.2缺失型地中海贫血的引物组及试剂盒

说明书

本发明提供一种用于基因分型检测‑α^4.2缺失型地中海贫血的引物组及试剂盒，属于分子生物学领域。所述引物组包括如下引物对：上下游引物序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的APF/APR；上下游引物序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的4.2F/4.2R。基于所述引物组，本发明还提供其相关的试剂盒。采用本发明的引物组、试剂盒检测‑α^4.2缺失型地中海贫血，具有快速、灵敏、安全等优点，可应用于‑α^4.2缺失型地中海贫血的检测。

技术领域

本发明属于分子生物学医药领域，具体涉及一种用于基因分型检测-α^4.2缺失型地中海贫血的引物组及试剂盒。

背景技术

地中海贫血(thalassemia,简称地贫)，是一组遗传性溶血性疾病，以地中海沿岸国家和东南亚各国多见。据WHO统计，全世界约有1.5亿人携带血红蛋白(Hb)病基因。在我国长江以南是本病的高发地区如广东、广西、海南、云南、贵州、四川及香港等地区常见，发病率达8％-15％。由于α-地贫具有普遍性、人口基数大、涉及范围广等特点，包括我国南方在内的重症地中海贫血患儿的出生是世界公认的公共健康卫生问题。

根据珠蛋白基因缺失或点突变的不同而致肤链合成障碍的不同，通常将地中海贫血分为α、β、δβ和γ等几种类型，其中以α和β地中海贫血最为常见。α地贫是由于调控α珠蛋白的基因缺失或功能缺陷，使血红蛋白(Hb)中的珠蛋白肤链有一种或几种不能合成或合成减少，导致Hb的组分改变的一类遗传性疾病。α地贫是我国长江以南发病率最高、影响最大的单基因遗传性血红蛋白疾病。

α-珠蛋白基因位于人类基因组第16号染色体短臂末端α-珠蛋白基因簇中(16p13.3)。该基因簇包括二个α基因(α1和α2)、一个胚胎期α类基因(ζ2),三个假基因(ψζ1,ψα2,ψα1)和一个功能未明的基因(θ1)，其序列顺序为:5'-ζ2-ψζ1-ψα2-ψα1-α2-α1-θl-3'，全长约50kb。

α-地中海贫血是由于α-珠蛋白基因突变或缺失引起的。根据分子缺陷可将其分为缺失型和非缺失型两大类。缺失型包括α⁰和α⁺地中海贫血，后者又分为右缺失(-α^3.7)、左缺失(-α^4.2)两类。到目前为止，全世界至少己报道了41种缺失型α-地中海贫血和至少32种α-地中海贫血点突变。在中国人己报道了至少8种缺失型α-地中海贫血，其中东南亚型缺失(--^SEA)、右侧缺失(-α^3.7)和左侧缺失(-α^4.2)是在我国最常见的α-地贫缺失类型。根据临床表现又将其分为静止型、标准型、血红蛋白H病与Hb Bart's水肿胎儿综合征四类。其中临床症状最重的为Hb Bart's水肿胎儿综合征，患儿通常不能存活；其次为血红蛋白H病(HbH)，其临床表现往往轻重不一，通常非缺失型HbH病人的临床表现往往比缺失型HbH病人更为严重。

目前该病尚无理想的治疗方法，研究表明在地贫高发区，对夫妇双方均为地贫基因携带者的孕妇在妊娠早期筛查或中期应用相应分析技术开展产前诊断和婚前携带者筛查，预防患儿的出生，是优生优育的重要措施因此，对于α-地贫的检测急需一种简单、能快速准确基因分型的技术手段。

目前对α-地贫筛查方法如血常规参数检测分析、红细胞渗透脆性试验、血红蛋白电泳试验等特异性不高，较易产生假阴性。对于α-地中海贫血的分子诊断,Southern Blot杂交技术是金标准,准确性高,但操作繁琐、标本用量大、费时费力、检测通量小而不适合常规检测；其他变性高效液相色谱(DHPLC)、TaqMan探针技术、DNA直接测序和DNA微阵列技术等。但这些方法检测过程繁琐、检测所用时间长、使用试剂或者仪器昂贵和特殊的标记引物等，因而不利于临床广泛的推广应用。