[发明专利]一种狼疮抗凝物检测试剂

说明书

本发明公开了一种狼疮抗凝物检测试剂，包括筛选试剂和确诊试剂，所述筛选试剂和确诊试剂中均包括缓冲液、激活剂silica和合成磷脂，筛选试剂的合成磷脂含量低，确诊试剂的合成磷脂含量高，所述合成磷脂由磷脂酰丝氨酸、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油和胆固醇组成，其质量比为5：30：40：15：10。本发明所述狼疮抗凝物检测试剂灵敏度高，为液体试剂，相对于DRVVT法，批间差异非常小，生产更为容易。

技术领域

本发明涉及临床检测技术领域，具体涉及的一种检测狼疮抗凝物的试剂。

背景技术

抗磷脂抗体是一类自身抗体统称，抗磷脂抗体可结合磷脂或和磷脂形成复合物的蛋白质。抗磷脂抗体根据该抗体识别的磷脂或磷脂结合蛋白质的不同而具有不同的名称。例如抗心磷脂抗体(anti-cardiolipin antibodies)、抗β2糖蛋白I抗体(anti-β2glycoprotein Iantibodies)、磷脂酰丝氨酸依赖性抗凝血酶原抗体(phosphatidylserine-dependent ant1-prothrombin antibodies)、狼疮抗凝物(lupusanticoagulant)。狼疮抗凝物最初是在红斑狼疮患者体内发现，后来发现在许多非红斑狼疮患者体内也大量存在。狼疮抗凝物形成的机理还不清楚，可能与用药有关，比如氯丙嗪，普鲁卡因胺，硫唑嘌呤等。狼疮抗凝物可引起抗磷脂抗体综合征(antiphospholipidsyndrome)，主要表现为不明原因的血栓拴塞，习惯性流产，血小板减少症，神经障碍。

狼疮抗凝物是一种获得性的抗磷脂抗体，对基于磷脂的体外血凝检测试剂如PT，APTT，DRVVT(dilute russell’s viper venom time test)等具有抑制作用，可以使PT，APTT,DRVVT的凝血时间延长。狼疮抗凝物可以结合带负电荷的磷脂复合物例如cardiolipin,phsaphatidylinositol,phosphatidylethanolamine,phosphatidylserine等(J.Clin.Invest.1980，66:397-405)，也可以和磷脂结合的血浆蛋白结合(Arch.Pathol.Lab.Med.，2002，126(11):1424-1429)。虽然在体外狼疮抗凝物可以抑制磷脂依赖性的血液凝固反应，从而使凝血时间变长，但在体内狼疮抗凝物可引起血栓的形成，具体的机理还不清楚，目前还没有证据表明狼疮抗凝物抑制凝血因子活性。

狼疮抗凝物的检测方法主要有DRVVT，APTT等。APTT是一个动态的检测方法，用以测定血浆的凝血时间。临床上APTT用来测定由于凝血因子的减少或缺失引起的出血病症，内源途径的因子缺陷或非特异性抑制因子的存在。APTT也可以用以评估肝素治疗的效果以及肝素治疗过程中的监测。APTT的检测首先用激活因子如Kaolin,ellagic acid,sillica激活FXII，在磷脂和钙离子存在的条件下，血液发生凝固。通过凝血时间的长短，以确定凝血系统是否正常。引起APTT的延长原因很多，可能是由于内源途径的某个因子的不足或缺失引起，也可能是由于大量的输血，肝素治疗，血凝因子的抑制剂，抗磷脂抗体等因素引起。当APTT延长时，要对每个可能引起的原因进行逐一检测，以确定引起凝血异常的真实原因。

DRVVT是通过RVV直接激活FX变成FXa,在低浓度的磷脂和钙离子存在的条件下引起血凝。这个途径不经过内源途径，因此可以避免VIII,IX,XI XII因子缺陷以及这些因子抑制物的干扰。

由于狼疮抗凝物的异质性，至今没有一个单一的检测方法能够检测所有的抗磷脂抗体的存在。因此狼疮抗凝物需要两种及以上的基于不同的机理的检测方法来确诊，这样才能提高狼疮抗凝物检测的准确性。APTT试剂和DRVVT用来监测狼疮抗凝物时，都包含筛选试剂和确诊试剂，筛选试剂中磷脂的含量较低，确诊试剂中磷脂的含量较高。筛选试剂磷脂含量较低，在狼疮抗凝物存在时凝血时间会延长。确诊试剂中包含较高的磷脂浓度。高浓度的磷脂可以抑制抗磷脂抗体的活性，从而使得凝血时间变短。虽然高浓度的磷脂也可以使正常的血浆凝血时间变短，但其变短的程度很小。而在含有狼疮抗凝物的血浆，高浓度的磷脂可是凝血时间大大变短。