[发明专利]用于检测右侧缺失α3.7地中海贫血的引物组及试剂盒

说明书

本发明提供了一种用于检测右侧缺失α^3.7地中海贫血的引物组及试剂盒，属于分子生物学领域。所述引物组包括如下引物对：上下游引物序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.3所示的APF/APR；上下游引物序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的3.7F/3.7R。本发明还提供了基于所述引物组的试剂盒。本发明的引物组和试剂盒具有快捷简洁、高度的稳定性、灵敏性和准确性，特异性。

技术领域

本发明属于分子生物学医药领域，具体涉及一种用于检测右侧缺失α^3.7地中海贫血的引物组及试剂盒。

背景技术

α-地中海贫血(简称α-地贫)是由于α-珠蛋白的基因缺失或功能障碍，导致a珠蛋白肤链合成减少或不合成引起,是人类最常见的一种不完全显性的单基因遗传性血红蛋白疾病。1925年，Thomas Cooley和Pear Lee在意大利儿童中首次描述这种溶血性贫血病，广泛发生于热带和亚热带国家，全球约18亿携带者，在我国长江以南是本病的高发地区如广东、广西、四川、重庆等地发病率高，大多以无明显症状的携带者形式广泛存在。研究表明在广东、广西α-地贫基因的人群携带率分别高达8.53-15.5％。由于α-地贫具有普遍性、人口基数大、涉及范围广等特点，包括我国南方在内的重症地中海贫血患儿的出生是世界公认的公共健康卫生问题。

α-珠蛋白基因位于人类基因组第16号染色体短臂末端α-珠蛋白基因簇中(16p13.3)。该基因簇包括二个α基因(α1和α2)、一个胚胎期α类基因(ζ2),三个假基因(ψζ1,ψα2,ψα1)和一个功能未明的基因(θ1)，其序列顺序为:5'-ζ2-ψζ1-ψα2-ψα1-α2-α1-θl-3'，全长约50kb。

α-地中海贫血是由于α-珠蛋白基因突变或缺失引起的。根据分子缺陷可将其分为:几个核苷酸的插入与缺失或单个碱基替换的非缺失型α-地贫和大片段基因的缺失型α-地贫两大类到目前为止，全世界至少己报道了41种缺失型α-地中海贫血和至少32种α-地中海贫血点突变。在中国人己报道了至少8种缺失型α-地中海贫血，其中东南亚型缺失(--^SEA)、右侧缺失(-α^3.7)和左侧缺失(-α^4.2)是在我国最常见的α-地贫缺失类型。根据临床表现又将其分为静止型、标准型、血红蛋白H病与Hb Bart's水肿胎儿综合征四类。其中临床症状最重的为Hb Bart's水肿胎儿综合征，患儿通常不能存活；其次为血红蛋白H病(HbH)，其临床表现往往轻重不一，通常非缺失型HbH病人的临床表现往往比缺失型HbH病人更为严重。

目前该病尚无理想的治疗方法，研究表明在地贫高发区，对夫妇双方均为地贫基因携带者的孕妇在妊娠早期筛查或中期应用相应分析技术通过遗传筛查和产前基因诊断选择性地淘汰中重症α-地贫胎儿则是控制该病发生的首要途径和有效预防措施。因此，对于α-地贫的检测急需一种简单、能快速准确基因分型的技术手段。

目前对α-地贫筛查方法如血常规参数检测分析、红细胞渗透脆性试验、血红蛋白电泳试验等特异性不高，较易产生假阴性。对于α-地中海贫血的分子诊断,Southern Blot杂交技术是金标准,准确性高,但操作繁琐、标本用量大、费时费力、检测通量小而不适合常规检测；其他TaqMan探针技术、变性高效液相色谱(DHPLC)、DNA直接测序和DNA微阵列技术等。但这些方法检测过程繁琐、检测所用时间长、使用试剂或者仪器昂贵和特殊的标记引物等，因而不利于临床广泛的推广应用。

现有基于缺口PCR(Gap-PCR)、寡核普酸探针杂交、高分辨的溶解曲线分析、TaqMan探针技术、变性高效液相色谱技术，多重连接酶依赖的探针扩增技术(MLPA)、基因芯片等技术，均需要提取外周血、绒毛和/或羊水中DNA，才能进行以后的实验操作，而DNA的质量是PCR成功的一个非常关键的因素，并且提取与纯化DNA过程极易污染，使得实验易出现假阴性或者假阳性。