[发明专利]用于基因分型检测东南亚缺失型α地中海贫血的方法及试剂盒

权利要求书

1.用于基因分型检测东南亚缺失型α地中海贫血的引物组，包括如下引物对：

上下游引物序列分别如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.1所示的APF/APR；

上下游引物序列分别如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的SEAF/SEAR。

2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述检测指以人体血液和/或体液和/或胚胎的遗传物质和/或人体基因组DNA为模板，用所述引物组进行PCR扩增后，将所得扩增产物进行电泳即可获知结果。

3.用于快速检测东南亚缺失型α地中海贫血基因型的试剂盒，包括权利要求1所述的引物组。

4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述快速检测指，以待测样品包括人体血液和/或体液和/或胚胎的遗传物质和/或细胞为PCR反应的模板，用所述引物组进行PCR扩增后，将所得扩增产物进行电泳即可获知结果。

5.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于，还包括用于进行PCR和/或电泳的试剂。

6.根据权利要求2-4任一所述的试剂盒，其特征在于，所述用于进行PCR的试剂包括dNTP、DNA聚合酶、缓冲液、双蒸水、MgCl₂；

所述用于进行电泳的试剂包括琼脂糖、蒸馏水、核酸染料；

所述核酸染料选自：EB、GelGreen、SYBR Green Ⅰ、GoldView、GelRed和GelGreen。

7.根据权利要求2-5任一所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR的反应体系为：模板1～4ng/μL；各引物：0.05～1μmol/L；MgCl₂浓度为1.5～5mM/L；dNTP的浓度为100～500μM/L；DNA聚合酶的浓度为1～4U/反应；

所述PCR的反应体系优选包括如下体积份数的各组分：MightyAmp Taq 0.1-1份、2×MightyAmp Buffer 10份、APF/SEAF 0.1-1份、SEAR 0.1-1份、APR 0.1-1份、模板+超纯水7-9.3份；

所述PCR的反应体系进一步优选包括如下体积份数的各组分：MightyAmp Taq 0.5份、2×MightyAmp Buffer 10份、APF/SEAF 0.5份、SEAR 0.3份、APR 0.2份、模板+超纯水8.5份；

优选的，所述引物组各引物摩尔浓度比例如下：

APF/SEAF∶SEAR∶APR＝5∶3∶2；

所述PCR的反应程序为：95℃3-5分钟；以94℃15-30秒、62-66℃25～35秒、72℃35秒为1个循环，进行34个循环；72℃5分钟；12℃12秒；

所述PCR的反应程序优选为：95℃5min；以94℃30sec、64℃30sec、72℃35sec为1个循环，进行34个循环；72℃5min；12℃12sec；

所述电泳指，将所述PCR反应产物置于质量比为2～2.5％琼脂糖凝胶中，在5V/cm电压下电泳约30～35分钟；所述琼脂糖凝胶中还添加有体积比0.005％核酸染料。

8.根据权利要求4或7所述的试剂盒，其特征在于，所述模板还包括固定在固体载体上的人体血液、和/或体液、和/或基因组DNA、和/或胚胎的遗传物质；

优选地，所述模板可以选自滤纸片干血斑样品、滤纸片干羊水样品、滤纸片干浆膜腔液样品、滤纸片干关节液样品、滤纸片干唾液样品、滤纸片干基因组DNA样品、和/或滤纸片干胚胎遗传物质样品。

9.根据权利要求4或8所述的试剂盒，其特征在于，所述人体体液选自下述物质的一种或多种：羊水、胚胎绒毛组织、浆膜腔液、关节液、唾液；所述血液包括外周血、脐带血、末梢血；所述胚胎的遗传物质包括配子如精子或卵子、卵裂期胚胎的卵裂球、囊胚滋养外胚层细胞，即囊胚细胞。

10.权利要求1所述的引物组，和/或，权利要求2-9任一所述的试剂盒在制备东南亚缺失型α地中海贫血检测试剂方面的用途，其特征在于，在标有东南亚缺失型α地中海贫血检测用途的包装内放入所述引物组，和/或，在装有所述引物组的容器上标有东南亚缺失型α地中海贫血检测用途。