[发明专利]基于高分辨率溶解曲线鉴定梨果肉低石细胞含量的SNP标记及其应用

权利要求书

1.与梨果肉石细胞含量的紧密相关的SNP标记引物对，其特征在于选自以下任意一对：Psc397-7-F：SEQ ID NO.1，Psc397-7-R：SEQ ID NO.2;或者Psc397-12-F：SEQ ID NO.3，Psc397-12-R：SEQ ID NO.4。

2.权利要求1所述的SNP标记引物对在鉴定梨果肉高或低石细胞含量中的应用。

3.权利要求1所述的SNP标记引物对在梨果肉石细胞含量早期鉴定和筛选的分子育种中的应用。

4.一种基于高分辨率溶解曲线鉴定梨果肉高或低石细胞含量的方法，其特征在于采用权利要求1所述的SNP标记引物对对果肉石细胞含量高的对照梨品种和果肉石细胞含量低的对照梨品种，以及待鉴定果肉石细胞含量的梨品种进行高分辨率溶解曲线分析，通过对待鉴定梨品种的高分辨率溶解曲线与上述两种对照梨品种的高分辨率溶解曲线的比较，鉴定该梨品种的果肉石细胞含量是高还是低；其中所述的果肉石细胞含量高的对照梨品种选自：砀山酥梨；所述的果肉石细胞含量低的对照梨品种选自：脆绿。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述的高分辨率溶解曲线反应体系按照LightCycler 480 High Resolution Melting Master试剂盒中的说明书进行，HRM分析在LightCycler480 II 荧光定量PCR仪上进行。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于高分辨率溶解曲线反应体系为20μL：含有30ng梨基因组DNA模板，1 × Master Mix，2.5mmol/L MgCl₂，200nM权利要求1所述的SNP标记引物对；扩增程序采用降落式PCR：95℃预变性10 min，然后95℃变性10 s、65-55℃退火10s，每循环下降0.5℃，72℃延伸10s的程序进行45个循环；PCR循环结束后进行熔解，其程序为：95℃1 min，40℃1 min，65℃1 s，再从70℃连续升温至95℃， 每升高0.04℃，收集荧光1次，最后降温至40℃；最后，在LightCycler480 II 的Gene Scanning软件中自动生成扩增产物的熔解曲线。