[发明专利]一种无血清杂交瘤细胞培养基

说明书

技术领域

本发明涉及一种无血清杂交瘤细胞培养基。

背景技术

自从1975年Kohler和Milstein建立杂交瘤技术以来，由杂交瘤细胞生产的单克隆抗体已应用到许多方面，特别是在疾病诊断和治疗及亲和层析分离方面,单克隆抗体具有十分诱人的应用前景，其中CD3单抗于1987年被美国FDA批准用于临床，1990年已达到1千万美元的年产值。美国制药工业协会调查报告显示，单抗位列所有医药生物技术产品之首。

单克隆抗体生产分体内法和体外法，体外细胞培养途径具有重要的优点，如：1.可以采用单元操作法培养，随着规模增大，降低生产成本；2.减少鼠类动物感染疾病给产物带来的污染，避免鼠的其它抗体的存在；3.可以生产人的单克隆抗体；4.过程可以工程化和自动控制，提高了重演性。

随着单克隆抗体的大量应用，杂交瘤细胞的大规模培养技术日趋成熟。英国Celltech公司的1万升气升式反应器已经开发成功，并应用于抗人ABO血型单抗的生产。目前，杂交瘤细胞的培养已不再以反应器培养规模作为重要的指标，而把更多的精力集中于杂交瘤细胞的代谢调控、反应器的操作模式和控制策略及无血清无蛋白培养技术等方面，以提高杂交瘤细胞密度和单抗的生产率，生产杂蛋白含量低、容易分离纯化的体内用单克隆抗体。

相对于贴壁依赖性细胞，杂交瘤细胞培养的放大可以更多地借助于微生物发酵的经验。八十年代初，已利用生物反应器大规模培养杂交瘤细胞。为了使培养放大工作更加有效，细胞高密度培养的研究引起重视，而首先遇到的则是培养条件的优化，并逐渐过渡到代谢的调控等方面。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种无血清杂交瘤细胞培养基，适合工业抗体生产，配合反应器或摇瓶培养，可维持杂交瘤细胞的高密度生长。本发明的无血清培养基，在代谢调控，细胞抗体表达以及高密度维持做了很大改进。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种无血清杂交瘤细胞培养基，是由以下浓度的组分组成的，各浓度单位若无特别说明，均为mg/L：

L-精氨酸100～300；

CuSO4·5H₂O 0.0005～0.005；

L-天门冬酰胺25～75；

L-天门冬氨酸10～30；

L-谷氨酸10～30；

Ni(NO₃)₂·6H₂O 0.00002～0.0002；

L-谷氨酰胺0～500；

ZnSO₄·7H₂O 0.06～0.6；

甘氨酸5～15；

CoCl₂·6H₂O 0.001～0.008；

L-组氨酸10～30；

NaSiO₃·9H₂O 0.001～0.01；

L-异亮氨酸25～75；

Na₃VO₄·12H₂O 0.0005～0.005；

L-赖氨酸盐酸20～60；

SnC1₂·2H₂O 0.00001～0.0001；

L-蛋氨酸10～30；

Na₂SeO₃ 0.002～0.01；

L-苯丙氨酸10～30；

FeSO₄·7H₂O 0.2～1.6；

L-脯氨酸10～30；

葡萄糖1000～4000；

L-丝氨酸15～45；

维生素C O.176～0.704；

L-苏氨酸10～30；

对羟基苯甲酸0.5～1.5；

L-色氨酸5～15；

丙酮酸钠55～550；

L-缬氨酸1O～30；

亚油酸0.01～0.05；

L-亮氨酸25～75；

β-巯基乙醇0.8～4.0；

二水L-酪氨酸二钠144～432；

乙醇胺1～5；

L-胱氨酸二盐酸25～75；

地塞米松0.001～0.005；

人转铁蛋白5～50；

胰岛素：8～20

纯化人转铁蛋白：1～30；

胆固醇：20～60；