[发明专利]一种用于快速检测21种点突变β地中海贫血等位基因的芯片、扩增试剂及试剂盒

权利要求书

1.一种用于快速检测21种点突变β-地中海贫血等位基因的芯片，其特征在于，所述芯片上固定有：

检测β-地中海贫血基因所对应的正常与突变等位基因位点的特异性寡核苷酸探针，其碱基序列如SEQ ID NO：1-32。

2.根据权利要求1所述的芯片，其特征在于，所述芯片上还固定有

阳性对照探针，其碱基序列如SEQ ID NO：33-34

阴性对照探针，其碱基序列如SEQ ID NO：35

显色体系控制探针，其碱基序列如SEQ ID NO：36。

3.根据权利要求1或2所述的芯片，其特征在于，所述芯片的基底材料选自：硝酸纤维素、醋酸纤维素、玻璃片、硅胶晶片、尼龙膜、聚丙烯膜和微缩磁珠组成的组。

4.一种用于快速检测21种点突变β地中海贫血等位基因的扩增试剂，其特征在于：包括如下核苷酸序列的引物组，其扩增的特征序列与权利要求1-3任一所述的基因芯片中的用于检测β-地中海贫血基因所对应的正常与突变等位基因位点的特异性寡核苷酸探针特异性结合：

B1F：SEQ ID NO：37；

B1R：SEQ ID NO：38；

B2F：SEQ ID NO：39；

B2R：SEQ ID NO：40，

所述扩增试剂中加入其它PCR扩增组分，通过一次PCR反应对待测样品或提取自待测样品的DNA直接进行β地中海贫血等位基因的检测，所述待测样品选自新鲜采集的抗凝外周血、-20℃－-80℃保存未反复冻融的陈旧性抗凝外周血、培养羊水细胞、绒毛、羊水、脐带血、末梢血、DBS样本和/或类似DBS处理的样本、唾液、胚胎的遗传物质包括配子如精子或卵子、卵裂期胚胎的卵裂球、囊胚滋养外胚层细胞，即囊胚细胞、多个细胞或单个细胞等。

5.根据权利要求4所述的PCR扩增试剂，其特征在于，用于一个反应的所述PCR扩增试剂中，含有：

6.根据权利要求4或5所述的扩增试剂，其特征在于，所述引物组中各引物摩尔浓度比例为：

优选地，用于一个反应的所述PCR扩增试剂中，含有：

使用时，添加无菌蒸馏水与待测样品或提取自待测样品的DNA以达到20份体积。

7.根据权利要求4-6任一所述的扩增试剂，其特征在于，所述引物的5′端标记有标记物，用于使扩增的条带带有所述标记物。

8.一种快速检测21种点突变β-地中海贫血等位基因的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1-3任一所述的芯片；

权利要求4-6任一所述的扩增试剂。

9.权利要求1-3任一所述的芯片的制备方法，步骤如下：

(1)配制探针工作液：将合成好的特异性探针稀释成10μM的工作液，以备点样用；

(2)固定探针：尼龙膜浸泡于10％的EDAC溶液中活化30分钟，纯水洗涤后室温晾干；在活化处理好的尼龙膜上点上所述工作液，每滴0.5μL；点膜结束后，将膜放置于室温进行反应；

(3)制备基因芯片：利用氢氧化钠停止反应，制得基因芯片；

其中，所述特异性探针包括用于检测β-地中海贫血基因所对应的正常与突变等位基因位点的特异性寡核苷酸探针，其碱基序列如SEQ ID NO：1-30所示。

10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于：所述特异性探针还包括

阳性对照探针，其碱基序列如SEQ ID NO：33-34，

阴性对照探针，其碱基序列如SEQ ID NO：35，

以及显色体系控制探针，其碱基序列如SEQ ID NO：36。