[发明专利]一种用于快速检测泰国型α-地中海贫血的PCR扩增引物组、扩增试剂及试剂盒

权利要求书

1.一种用于快速检测泰国型α-地中海贫血的PCR扩增引物组，其特征在于：包含如SEQID NO.2和SEQ ID NO.3所示的上下游引物THAIF/THAIR，用于扩增α-珠蛋白基因簇中--^THAI等位基因，PCR扩增特征片段为478bp；

所述PCR扩增引物组可直接以待测样品和/或自待测样品提取的DNA为模板进行扩增；

所述待测样品选自新鲜采集的抗凝外周血、-20℃－-80℃保存未反复冻融的陈旧性抗凝外周血、培养羊水细胞、绒毛、羊水、脐带血、末梢血、唾液、DBS样本和/或类似DBS处理的样本、胚胎的遗传物质包括配子如精子或卵子、卵裂期胚胎的卵裂球、囊胚滋养外胚层细胞，即囊胚细胞。

2.根据权利要求1所述的PCR扩增引物组，其特征在于：还包含SEQ ID NO.1所示的引物；

其中SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.3分别作为上、下游引物APF/APR用于扩增α-珠蛋白基因簇中正常人基因，PCR扩增特征片段为317bp。

3.根据权利要求2所述的PCR扩增引物组，其特征在于：引物组中三条引物混合在一起，SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3的摩尔浓度比例为2:3:5。

4.一种用于快速检测泰国型α-地中海贫血的PCR扩增试剂，其特征在于，用于一个反应的所述PCR扩增试剂中，含有：

其中所述引物THAIF如SEQ ID NO.2所示，所述引物THAIR如SEQ ID NO.3 所示，所述引物APF如SEQ ID NO.1所示，

所述PCR扩增试剂适合直接加入蒸馏水和待测样品和/或自待测样品提取的DNA达到20份体积进行扩增；

所述待测样品选自新鲜采集的抗凝外周血、-20℃－-80℃保存未反复冻融的陈旧性抗凝外周血、培养羊水细胞、绒毛、羊水、脐带血、末梢血、唾液、DBS样本和/或类似DBS处理的样本、多个细胞或单个细胞、胚胎的遗传物质包括配子如精子或卵子、卵裂期胚胎的卵裂球、囊胚滋养外胚层细胞，即囊胚细胞。

5.根据权利要求4所述的PCR扩增试剂，其特征在于，其中三条引物SEQ ID NO.1、SEQID NO.2和SEQ ID NO.3的摩尔浓度比例为2:3:5。

6.根据权利要求5所述的PCR扩增试剂，其特征在于，用于一个反应的所述PCR扩增试剂中，含有：

7.一种用于快速检测泰国型α-地中海贫血的试剂盒，包含权利要求1-3任一所述的引物组以PCR扩增所需的常规试剂；所述常规试剂包括缓冲液、DNA扩增酶、MgCl₂和dNTPs。

8.一种快速检测泰国型α-地中海贫血的方法，其特征在于，采用权利要求1－3任一所述的引物组或权利要求4-7任一所述的PCR扩增试剂对待测样品进行PCR扩增；包括如下步骤：

(1)准备待测样品，

(2)准备PCR扩增体系，

(3)运行PCR程序并检测扩增产物；

只得到一条带317bp条带时，结果初步判断为正常型；

得到478bp和317bp两条带时结果初步判断为携带--^THAI等位基因；

仅得到一条478bp条带时，结果初步判断为--^THAI等位基因纯合子；

所述待测样品选自新鲜采集的抗凝外周血、-20℃－-80℃保存未反复冻融的陈旧性抗凝外周血、培养羊水细胞、绒毛、羊水、脐带血、末梢血、DBS样本和/或类似DBS处理的样本、多个细胞或单个细胞。

9.根据权利要求4-7任一所述的方法，其特征在于：所述PCR程序95℃预变性3～5分钟，然后94℃15～30秒，62-66℃退火25～35秒，28～38个循环。