[发明专利]一种促进牛樟芝菌丝体生长和活性产物合成的方法

说明书

本发明公开了一种促进牛樟芝菌丝体生长和活性产物合成的方法。本技术是利用牛樟树的幼茎和/或幼叶细胞经液体悬浮培养后所得到的培养液或培养液干粉作为牛樟芝的液态发酵的添加物，继续培养至发酵结束。本发明可大幅提高牛樟芝的液体发酵水平，对菌丝体生长和活性产物的合成具有明显的促进作用。本发明技术不受季节、环境、病虫害影响，同时不占用耕地，生产周期较短、成本较低，且对已有的牛樟树资源不构成危害。该技术的应用为牛樟芝高活性物质的液体发酵制备提供了有力的保证。

技术领域

本发明属于微生物发酵领域，具体涉及一种促进牛樟芝菌丝体生长和活性产物合成的方法。

背景技术

牛樟芝(Antrodia Camphorat)是20世纪90年代在台湾发现的药用多孔菌，为台湾特有的珍贵真菌，亦名牛樟菇、樟芝，有“台湾森林红宝石”之美称。牛樟芝寄生于台湾特有的保护树种牛樟树上，生长极为缓慢，自然产量稀少。作为传统中药材，牛樟芝的子实体和菌丝体具有安神、怯风行气、化疲活血、温和消积，解毒消肿及镇静止痛之效，为上好的防腐解毒剂；现代药理学研究表明，牛樟芝对肝病有疗效，具有抗肿瘤、抗病毒、抗过敏、降血脂、降血糖等作用，是上等的食(药)用真菌。牛樟芝的成分复杂，其中主要的活性成分包括三萜、多糖和腺苷等，三萜类化合物是牛樟芝最重要的化学成份之一，也是牛樟芝的萃取物中苦味成份的来源。

目前，自然界中牛樟树存量不多，适合牛樟树生长的地区有限，导致牛樟木资源稀缺；而野生牛樟芝生长缓慢，子实体产量极少，但市场需求在不断增大，野生牛樟芝市场价格一直居高不下。鉴于牛樟树资源的稀缺和牛樟芝的神奇功效，科学家将牛樟芝的获取聚焦到了人工培养上，包括椴木培养、固态培养和液体发酵。椴木培养利用樟芝原有宿主牛樟树或其他椴木(树龄都在80年以上的椴木)为培养基栽培牛樟芝，培养时间大约2年。固态培养虽然能够培养出和野生牛樟芝类似的子实体，但其生产周期较长(3个月)、成本也比较高，同时，无论椴木培养还是固体培养基中也需要牛樟木，进而导致牛樟树盗阀，滥采。牛樟芝的液体发酵技术已经有了较多的研究，相比与椴木和固态培养，液体发酵周期较短(少于20天)，可大量生产出牛樟芝菌丝体，利于工业化、规模化生产。但总体上菌丝体的产量还处于较低水平，同时，生物活性物质的含量不但低而且同野生子实体中的物质活性有较大差异，有文献报道在牛樟芝的液体发酵中添加牛樟树的茎、叶、果实等部位的干粉或其提取物均能有效促进菌丝体的生产和提高重要代谢产物的含量和活性，但该方法在工艺和生产成本等方面受到了极大的限制，同时对牛樟树也具有巨大的破坏作用。

因此，如何在保护牛樟树这一珍贵资源的前提下，开发一种具有牛樟树特定作用、低成本，同时对牛樟芝的菌丝体生产、活性产物积累具有明显促进作用的培养方法是亟待解决的关键问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种促进牛樟芝菌丝体生长和活性产物合成的方法。

本发明所采取的技术方案是：

一种促进牛樟芝菌丝体生长和活性产物合成的方法，是以牛樟树的幼茎和/或幼叶细胞的愈伤组织作为接种物进行液体悬浮培养，所获液体悬浮培养物和/或经处理后得到的液体悬浮培养物干粉添加至牛樟芝的液态发酵液中，继续培养至发酵结束，从而大大提高牛樟芝的菌丝体生物量和生物活性物质的产量。

优选的，愈伤组织选自牛樟树幼茎和/或幼叶诱导的在固体培养基上呈淡白色、生长状态良好、质地疏松的愈伤组织。本发明优选愈伤组织以30-50g/L的接种量接种到MS培养基(pH为6.0-6.5)中进行培养16-24d，得到培养液(包括其中的有效成分)，即为本发明的液体悬浮培养物。

优选的，液体悬浮培养物按照30-350ml/L的添加量(干物质为0.5-30g/L)添加到牛樟芝的液态发酵液中。

优选的，液体悬浮培养物按照60ml/L的添加量(干物质为0.5-30g/L)添加到牛樟芝的液态发酵液中，可获得较大的菌丝体生物量以及多糖含量和三萜含量。