[发明专利]外泌体p-ERK在制备结直肠癌诊断产品中的应用

说明书

本发明公开了外泌体中p‑ERK在诊断结直肠癌中的应用。本发明的研究结果表明，正常非癌细胞的培养液中的外泌体中不含p‑ERK，结直肠癌细胞的培养液中的外泌体中含有较多p‑ERK，因此可将外泌体中p‑ERK作为诊断结直肠癌的分子标志物。本发明的研究成果为临床提供了一种具有广泛应用前景的结直肠癌无创诊断方法。

技术领域

本发明属于生物医学领域，涉及癌症的诊断，具体涉及外泌体p-ERK在诊断结直肠癌中的应用。

背景技术

肿瘤组织活检常作为肿瘤诊断的金标准，但是组织活检技术有一定的局限性。主要表现为：肿瘤具有异质性；某些患者不适合做组织活检；组织活检的滞后性对患者的治疗不利。因此对于癌症的诊断和检测技术有更高的要求。液体活检技术的出现，解决了上述问题，也缩短了癌症的诊断时间。作为体外诊断的一个分支，液体活检就是通过检测血液或者尿液等体液中的某些生物活性分子，从而对癌症等疾病做出诊断。其优势在于能通过非侵入性取样降低活检的危害；由于其具有敏感性高、检测快捷等特点，而有利于肿瘤的早期发现。液体活检主要包括三种检测方法：游离DNA的检测、循环肿瘤细胞的检测、细胞外泌体的检测。

外泌体是细胞内的多囊泡体与细胞质膜融合后主动分泌到细胞外的大小均一，直径为30-100nm的脂质双分子层结构囊泡。外泌体可由不同类型细胞(其中包括肿瘤细胞)脱落释放，在大多数体液如外周血、尿液、唾液、腹水、羊水、乳汁、脑脊液、关节液、支气管肺泡灌洗液等体液中可检测到。外泌体中含有许多生物活性物质，如蛋白质、mRNA，microRNA，DNA片段等，这些生物活性物质可在细胞间相互传递，进而调节细胞的生理功能。肿瘤细胞来源的外泌体可以通过多种途径调控肿瘤环境，进而促进肿瘤的进展。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可用于结直肠癌早期诊断的分子标志物。本发明研究发现，结直肠癌细胞培养液中外泌体内含有p-ERK，而正常的非癌细胞的细胞培养液中的外泌体中不含有p-ERK。根据以上研究成果，申请人发现了一种可用于结直肠癌无创诊断的方法，通过检测体液优选血液中外泌体p-ERK的有无或者表达量即可用于诊断结直肠癌。

根据本发明的一个方面，本发明提供了检测外泌体中p-ERK的试剂在制备结直肠癌诊断产品中的应用。

进一步，所述检测外泌体中p-ERK的试剂包括任何可用于检测外泌体中p-ERK存在与否或检测p-ERK表达量的方法中使用的试剂。

所述检测p-ERK存在与否或检测p-ERK表达量的方法选自以下组：免疫组织化学测定法、酶联免疫吸附测定法、原位杂交、色谱法、液相色谱法、尺寸排阻色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法、质谱法、串联质谱法、基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱法、电喷雾电离质谱法、表面增强激光解吸/电离飞行时间质谱法、四极飞行时间质谱法、大气压光电离质谱法、傅里叶变换质谱法、基质辅助激光解吸/电离-傅里叶变换离子回旋共振质谱法、二次离子质谱法、放射性免疫测定法、显微镜检查、基于微流体芯片的测定法、表面等离子体共振、测序、蛋白质印迹测定法。

进一步，检测外泌体中p-ERK的试剂包括p-ERK的抗体。所述抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体、或免疫血清。

根据本发明的另一个方面，本发明还提供了外泌体中p-ERK作为标志物在开发和/或设计结直肠癌诊断产品中的应用。

根据本发明的再一个方面，本发明还提供了一种结直肠癌的诊断产品。所述诊断产品包括检测外泌体中p-ERK的试剂。

进一步，所述检测外泌体中p-ERK的试剂包括任何可用于检测外泌体中p-ERK存在与否或检测p-ERK表达量的方法中使用的试剂。