[发明专利]用于骨关节修复的带鱼活性提取物在审
申请号: | 201710476828.8 | 申请日: | 2017-06-21 |
公开(公告)号: | CN107245508A | 公开(公告)日: | 2017-10-13 |
发明(设计)人: | 周建波 | 申请(专利权)人: | 兰溪市沉默生物科技有限公司 |
主分类号: | C12P21/06 | 分类号: | C12P21/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/16;A61P19/02 |
代理公司: | 北京华仲龙腾专利代理事务所(普通合伙)11548 | 代理人: | 李静 |
地址: | 321100 浙江省*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 用于 关节 修复 带鱼 活性 提取物 | ||
1.用于骨关节修复的带鱼活性提取物,其特征在于:由复合酶酶解、多级膜过滤、纳滤、HPLC洗脱和冷冻干燥制备得到;所述的复合酶酶解步骤为采用海洋芽孢杆菌产碱性蛋白酶和条斑紫菜蛋白酶酶解带鱼鱼肉匀浆液,并采用超声波辅助酶解。
2.根据权利要求1所述的用于骨关节修复的带鱼活性提取物的制备方法,其特征在于:所述的冷冻干燥步骤为:预冻:-35~-45℃预冻3~5h;冷冻干燥:-45~-35℃,3~5Pa冷冻干燥5~7h,-10~-5℃,10~20Pa冷冻干燥2~3h;升华干燥:10~15℃,50~60Pa升华干燥3~4h;解析干燥:7~14℃,3~5Pa解析干燥2~4h,得到用于骨关节修复的带鱼活性提取物。
3.根据权利要求1所述的用于骨关节修复的带鱼活性提取物的制备方法,其特征在于:所述的冷冻干燥前加入30~40wt%辅料,辅料的成分及其重量份为:80~90份右旋糖酐-40和2~5份活性肽。
4.根据权利要求3所述的用于骨关节修复的带鱼活性提取物的制备方法,其特征在于:所述的活性肽的氨基酸序列为HSHACASYYCSKHSHACKTACAKFCGTASCTHYLSYLCRVLHPGKLCACVNCSR。
5.根据权利要求1所述的用于骨关节修复的带鱼活性提取物的制备方法,其特征在于:所述的复合酶酶解步骤中海洋芽孢杆菌产碱性蛋白酶和条斑紫菜蛋白酶的加入量为1~2wt%,酶解温度为25~35℃,pH为7.0~9.0,酶解时间为40~60min。
6.根据权利要求1所述的用于骨关节修复的带鱼活性提取物的制备方法,其特征在于:所述的多级膜过滤步骤为先将滤液用0.2~0.4µm微滤膜过滤,滤液再分别通过截留分子量14-18kDa、6-8kDa的超滤膜,浓缩滤液。
7.根据权利要求1所述的用于骨关节修复的带鱼活性提取物的制备方法,其特征在于:所述的HPLC洗脱步骤中洗脱步骤为0~5min,用1~3%三氟乙酸和98~99%乙腈洗脱,流速为0.8~1.5ml/min;5~15min,用5~7%三氟乙酸和93~95%乙腈洗脱,流速为0.8~1.5ml/min;15~30min,用8~12%三氟乙酸和88~92%乙腈洗脱,流速为0.8~1.5ml/min。
8.根据权利要求1所述的用于骨关节修复的带鱼活性提取物的制备方法,其特征在于:所述的HPLC洗脱步骤中洗脱结束后收集在250nm有吸收的洗脱物,合并并浓缩。
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