[发明专利]HPV检测中黏性样本DNA提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及基因检测领域，具体涉及一种HPV检测中黏性样本DNA提取方法。

背景技术

人乳头瘤病毒（HPV）可以通过多种途径感染生殖道，从而导致尖锐湿疣以及宫颈病变，甚至可能引起宫颈癌的发生，从高危型HPV的持续感染到一般的宫颈癌前病变并最终发展为宫颈癌大约需要5~10年。因此，有针对性地进行HPV的分型检测对于宫颈癌的早期诊断和治疗具有重要意义。

目前大都常用的基因芯片技术在检测人乳头瘤病毒（HPV）时，会遇到样本中有大量宫颈黏液，对提取DNA操作时影响甚大。

在吸取样本时，如果遇到大量宫颈黏液，离心后没办法得到底部的沉淀，可能抑制扩增。同时，去上清时吸走黏液可能带走大部分宫颈脱落细胞，使结果呈假阴性。此外，如果为了破坏那些黏液加入过量细胞裂解液的话，很大可能会影响DNA模板含量，影响后续扩增、杂交。

发明内容

为解决现有技术的HPV检测过程中样本黏液含量过高导致DNA提取困难的技术问题，本发明提供一种解决上述问题的HPV检测中黏性样本DNA提取方法。

一种HPV检测中黏性样本DNA提取方法，运用所述HPV检测中黏性样本DNA提取方法需使用以下组分：

离心管、NaOH溶液、生理盐水、细胞裂解液。

所述HPV检测中黏性样本DNA提取方法包括以下步骤：

步骤一：吸取1mL黏性样本至所述离心管中；

步骤二：向所述离心管中加入100μL的所述NaOH溶液，振荡混匀后，消化处理一定时间；

步骤三：将所述离心管于13000rpm下离心10min后，去除上清液，保留细胞沉淀；

步骤四：向所述离心管中加入1mL所述生理盐水，反复吹打混匀；

步骤五：重复所述步骤三和所述步骤四；

步骤六：再次重复所述步骤三，然后向所述离心管中加入50μL细胞裂解液，悬浮所述细胞沉淀；

步骤七：将所述离心管沸水浴加热10min；

步骤八：将所述离心管于13000rpm下离心10min后，保留上清液作为检测样本。

在本发明提供的HPV检测中黏性样本DNA提取方法的一种较佳实施例中，所述NaOH溶液为1.75mol/L的NaOH溶液。

在本发明提供的HPV检测中黏性样本DNA提取方法的一种较佳实施例中，所述步骤二中消化处理10min。

相较于现有技术，本发明提供的所述HPV检测中黏性样本DNA提取方法具有以下有益效果：

一、所述HPV检测中黏性样本DNA提取方法采用NaOH溶液对宫颈黏液进行处理。宫颈黏液的主要成分是糖蛋白，一定浓度的NaOH溶液能有效的消化这部分蛋白质，使其转化为稀液，离心时上清液与底部沉淀正常分离，细胞裂解液也以正常量添加。保证了后续的扩增、杂交等操作的正常进行，以及最终检测结果的准确无误。

二、所述HPV检测中黏性样本DNA提取方法在消化处理后不使用酸性试剂中和处理，而利用生理盐水进行多次洗涤，使所述细胞沉淀处于趋向于中性的弱碱性环境。此环境中的DNA性状更为稳定，后续的检测操作也更为方便。

三、所述HPV检测中黏性样本DNA提取方法使得对黏性样本的处理具有了一套通用的处理方法，无需根据样本情况调整处理流程，提取效率得到明显改善，保证了实验结果，降低了复查率。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显 然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施 例。

运用所述HPV检测中黏性样本DNA提取方法需使用以下组分：1.5mL的离心管、1.75mol/L的NaOH溶液、生理盐水、细胞裂解液。

所述HPV检测中黏性样本DNA提取方法包括以下步骤：

步骤一：吸取1mL黏性样本至所述离心管中；

步骤二：向所述离心管中加入100μL的所述NaOH溶液，振荡混匀后，消化处理10min；

步骤三：将所述离心管于13000rpm下离心10min后，去除上清液，保留细胞沉淀；

步骤四：向所述离心管中加入1mL所述生理盐水，反复吹打混匀；

步骤五：重复所述步骤三和所述步骤四；

步骤六：再次重复所述步骤三，然后向所述离心管中加入50μL细胞裂解液，悬浮所述细胞沉淀；

步骤七：将所述离心管沸水浴加热10min；