[发明专利]一种诱导多能干细胞分泌素的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种诱导多能干细胞分泌素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤:

Sl重悬诱导多能干细胞，得诱导多能干细胞悬液:

S2将步骤Sl所得诱导多能干细胞悬液分布于三维载体，并置于一生物反应器的诱导多能干细胞培养液基中，在37℃、5％CO₂条件下培养24-72h，得诱导多能干细胞:

S3在步骤S2中诱导多能干细胞分裂旺盛阶段，用磷酸缓冲液冲洗诱导多能干细胞和三维载体2-4次，然后向生物反应器中加入基础培养液IMDM/F12与磷酸缓冲液继续培养6-24h，收集生物反应器中的上清液，得分泌素溶液:

S4将步骤S3所得分泌素溶液离心，超膜过滤，浓缩，即得；

所述步骤S2中细胞培养基包括基础培养基IMDM/F12和添加剂:其中，添加剂为2-4mg/mL人白蛋白、40-60μg/mL维生素C和3-7mg/mL人参皂苷单体Rbl；

所述步骤S4中浓缩方式为通过切向流过中空纤维超滤柱，体积浓缩1/8；所述超膜过滤截留的分子量的为30KD。

2.如权利要求1所述的诱导多能干细胞分泌素的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中细胞培养基由基础培养基IMDM/F12和添加剂组成:其中，添加剂为3mg/mL人白蛋白、50μg/mL维生素C和5mg/mL人参皂苷单体Rbl。

3.如权利要求1所述的诱导多能干细胞分泌素的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中诱导多能干细胞密度为l×10⁸-1×10⁹个/L。

4.如权利要求1所述的诱导多能干细胞分泌素的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中磷酸缓冲液的浓度为0.01M，pH值为7.30。

5.如权利要求1所述的诱导多能干细胞分泌素的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中基础培养液IMDM/F12与磷酸缓冲液的体积比为1:(2-6)。

6.如权利要求1所述的诱导多能干细胞分泌素的制备方法制得的诱导多能干细胞分泌素在制备化妆品中的应用。