[发明专利]一个簇毛麦4VL染色体特异的共显性分子标记及其引物和用途

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一个簇毛麦4VL染色体特异的共显性分子标记及其引物和用途。

背景技术

栽培品种遗传基础日趋狭窄已成为小麦育种取得突破性进展的主要瓶颈(李振声，2010)。小麦近缘种属蕴藏丰富的抗生物和非生物胁迫以及高产、优质因子等基因资源，通过远缘杂交将近缘物种中的优良基因导入普通小麦，是拓宽小麦遗传基础、推进小麦育种取得突破性进展的有效途径(吉万全等，2001；张增艳等，2004；王述民等，2011)。

簇毛麦(Haynaldia villosa,基因组VV)原产于地中海沿岸，是栽培小麦的二倍体近缘物种，对白粉病几乎所有生理小种表现高抗或免疫，高抗叶锈、条锈和秆锈病，对全蚀病、眼斑病、黄花叶病也都有较好的抗性，并且还具有抗寒性好、耐旱、分蘖力强、小穗数多和籽粒蛋白质含量高等多种优良性状，是小麦遗传性状改良的重要基因资源(De Pace C，2011)。已有研究发现簇毛麦4VL染色体上具有抗小麦眼斑病、控制小麦编码醇溶蛋白以及小麦耐盐性的基因。为了利用簇毛麦4VL染色体的优异基因，本实验室目前正在利用部分同源配对控制体系创造出更多的携有目的基因的片段大小不同的涉及4VL染色体的结构变异体。准确高效无误的鉴定外源染色体身份，对加速小麦种质资源创新和利用，提高外源染色体的选择效率，降低劳动成本具有重要的现实意义。高密度的分子标记对于精确鉴定外源染色体的易位身份具有重要意义。但是目前簇毛麦各染色体的特异分子标记数量较少，并且主要分布在簇毛麦含有抗黄花叶病(WYMV)Wss1基因和抗白粉病Pm21基因的4VS和6VS染色体臂上，而其他染色体上分布较少，因而限制了其他染色体上优异基因的挖掘、定位和利用。

表达序列标签(EST)是将mRNA反转录成cDNA并克隆到载体构建成cDNA文库后，大规模随机挑选cDNA克隆，对其3'或5'端进行一步法测序所获得的短的cDNA部分序列，一般长度为300～500bp，代表一个完整基因的一部分。EST标记除具有一般分子标记的特点外，还具有信息量大、通用性好、开发简单、快捷、费用低、易于操作、稳定性好和重复性高等优点，受到广泛关注。EST来自于转录区，其保守性较高，在种族和种属间的通用性比来源于非表达序列标签的标记更好。根据定位于小麦染色体上各个区段的EST序列开发分子标记，可以快速追踪相应近缘物种的同源染色体或染色体片段，甚至对相应区域附近的目标基因进行定位。近年来，随着小麦等植物EST计划的实施，在NCBI数据库中每年所登陆的麦类作物(包括小麦、大麦、黑麦、燕麦和粗山羊草等)EST数目快速增长，为基于EST的分子标记的开发和利用提供了丰富的序列信息资源。因此，利用已有的EST序列信息开发簇毛麦4VL染色体的特异分子标记对于簇毛麦4VL染色体结构变异体的准确鉴定和目的基因的挖掘具有主要意义。

本研究中所用的植物材料来源如下：簇毛麦(Haynaldia villosa)从英国剑桥植物园引进；硬粒小麦(Triticum durum L.，编号“中引1286”，基因组AABB)由中国农业科学院引种组从墨西哥国际玉米改良中心引进；普通小麦品种中国春(T.aestivum cv.Chinese Spring，CS)、硬粒小麦-簇毛麦双倍体(T.durum-H.villosa amphiploid，又称为硬簇麦，基因组AABBVV)、一套普通小麦中国春-簇毛麦二体异附加系DA1V-DA7V、T4DL·4VS纯合易位系、T5DL·4VL纯合易位系和T4DS·4VL纯合易位系均由南京农业大学细胞遗传所提供。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的上述缺陷，提供一种特异性的分子标记引物。

本发明的另一目的是提供该分子标记引物的应用。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：

簇毛麦4VL染色体的特异性分子标记，选自标记CINAU321；标记CINAU321的引物序列为：CINAU321F：SEQ ID NO.1，CINAU321R：SEQ ID NO.2，用标记CINAU321的引物从含有簇毛麦4VL染色体的植株中能扩增出约1150bp的特异条带。

本发明所述的簇毛麦4VL染色体的特异性分子标记引物，选自CINAU321F/CINAU321R，引物CINAU321F序列为：SEQ ID NO.1，引物CINAU321R序列为：SEQ ID NO.2。本发明中能特异追踪簇毛麦4VL染色体的标记的引物是以小麦EST(BE637255)序列为模板设计而得到的。