[发明专利]一株白花丹参内生真菌BDF09及其应用

说明书

本发明公开了一株白花丹参内生真菌BDF09及其应用。菌株镰刀菌(Fusarium sp.)BDF09从白花丹参根中分离到，其菌丝体的不同溶剂提取物对家兔的体外凝血时间(CT)、凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血酶时间(APTT)等指标均有影响，BDF09具有抗血栓以及抗凝血作用，可为生产新型抗凝血类药物提供新的资源和途径。

技术领域

本发明涉及微生物以及医药技术领域，特别是涉及一种具有抗凝血功能的白花丹参内生镰刀菌(Fusarium sp.)BDF09及其抗凝血功能应用。

背景技术

心血管疾病是影响人类健康的主要疾病之一，目前临床上采用的抗血栓药物肝素，近年来发现其不能抑制与纤维蛋白结合的凝血酶，这已成为血栓复发的关键因素。因此，研究安全有效、适于长期服用的抗凝血、抗血栓药物具有重要意义。

丹参为唇形科鼠尾草属植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎，是最常用的活血化瘀中药之一。丹参中主要功效物质包括脂溶性的丹参酮类和水溶性的丹酚酸类化学成分。白花丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.f.alba)是紫花丹参的白花变异种，可有效改善血液流变学指标、降低血液粘稠度、降低血浆纤维蛋白原、抑制血小板聚集、阻止血栓形成、扩张微血管、改善微循环。白花丹参除了有紫花丹参的作用和用途外，对治疗血栓闭塞性脉管炎具有独特疗效。但由于过度采挖，白花丹参野生资源濒临绝迹。因此，寻找一种可行的替代方法来生产这些药用活性物质成为当今的研究热点。

内生真菌(Endophytic fungi)是指在植物生活史中某一段时期生活在植物组织内，对植物没有引起明显病害症状的真菌。目前发现内生真菌在植物体内是普遍存在的，但从不同植物体内分离到的内生真菌的种类和数量具有很大的差异，少则数种，多则百余种，主要与气候环境、取样策略、培养条件以及植物本身的感染性等有关。内生真菌有时能够产生与宿主植物相同或相似的药用活性成分。丹参内生菌的次生代谢产物可构成一个庞大的化合物库,是发现新的抗凝血物质的天然资源。目前尚未发现从丹参分离的具有抗凝血功能的内生真菌。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明从白花丹参根中分离到一株具有抗凝血活性的菌株镰刀菌(Fusarium sp.)BDF09，通过研究其菌丝体的不同溶剂提取物对家兔的体外凝血时间(CT)的影响以及不同溶剂提取物对凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血酶时间(APTT)等指标的影响，评价BDF09的抗血栓以及抗凝血作用，为研制安全无毒的新型抗凝血类药物提供新的资源和途径。

本发明的目的之一在于提供一株具有抗凝血活性的菌株镰刀菌(Fusarium sp.)BDF09，该菌株已于2015年11月4日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称 CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏号为CGMCC No.11414。

本发明所述的镰刀菌(Fusarium sp.)BDF09，从药用植物白花丹参(Salviamiltiorrhiza Bge.f.alba)的根中分离出来。该菌株在PDA培养基上的菌落表面呈白紫色绒状、背面紫色，生长迅速。光学显微镜镜检，菌丝体无色，小型分生孢子为单胞或双胞大型分生孢子有少许弯曲。

本发明的目的之二在于提供上述镰刀菌(Fusarium sp.)BDF09的培养方法，所述方法包括菌株活化的步骤和活化后菌株在液体培养基中发酵培养的步骤。

具体的，菌株活化培养基为PDA培养基，菌株发酵培养的液体培养基为PDB培养基，培养条件为25℃、有氧培养，如摇床(25℃，150r/min)振荡培养。

本发明的目的之三在于提供上述镰刀菌(Fusarium sp.)BDF09的发酵培养物、菌丝体的有机溶剂提取物。上述镰刀菌(Fusarium sp.)BDF09的发酵培养物、菌丝体的有机溶剂提取物均具有抗凝血、抗血栓功能。