[发明专利]一种血筛三项多色单管检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种血筛三项多色单管检测试剂盒，具体涉及HBV、HCV、HIV病毒检测试剂盒。

背景技术

乙型肝炎病毒简称乙肝病毒。是一种DNA病毒，属于嗜肝DNA病毒科（hepadnaviridae），乙型肝炎病毒DNA是乙肝病毒的脱氧核糖核酸，是乙肝病毒的的核心物质和病毒复制的基础。在病毒DNA携带的遗传基因 ，乙型肝炎病毒DNA分别复制出新的病毒外壳和DNA核心，形成大量的新病毒，释放出来继续感染其他肝细胞，引发乙型病毒性肝炎疾病。丙型肝炎由丙型肝炎病毒（HCV）感染所致，据世界卫生组织估计，全球有1.7亿人感染HCV。在我国健康人群抗HCV阳性率为0.7%~3.1%，约3800万人。由于病毒生物学特点和宿主免疫功能等多方面因素，机体免疫往往难以有效清除病毒，致使约50%~80%HCV感染者发展为慢性肝炎，其中20%~30%将发展成肝硬化。肝硬化患者中每年有1%~4%发展成为肝细胞癌症。人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus;abbr:HIV），即艾滋病（AIDS，获得性免疫缺陷综合征）病毒，是造成人类免疫系统缺陷的一种病毒。HIV通过破坏人体的T淋巴细胞，进而阻断细胞免疫和体液免疫过程，导致免疫系统瘫痪，从而致使各种疾病在人体内蔓延，最终导致艾滋病。由于HIV的变异极其迅速，难以生产特异性疫苗，至今无有效治疗方法，对人类健康造成极大威胁。这三种病毒都能经过血液传播，在血液需求量如此巨大的现代医疗中，血液安全是一项具有重大意义的指标。所以寻求一种快速、简便、准确检测血液安全性的方法对于临床诊治十分必要。

目前，市面上的HBV、HCV、HIV病毒检测试剂盒一般使用的是普通荧光探针，普通探针存在着检测灵敏度低，特异性差等缺点，容易导致检测出假阴性和假阳性结果。同时市面上已有的检测试剂盒,普遍使用的各项目单独检测，并使用热启动酶反应体系，启动时间长，检测过程耗费的时间非常长而且过程繁琐。

发明内容

为解决上述市面上普通HBV、HCV和HIV病毒检测试剂盒检测灵敏度低，特异性差以及检测时间长、过程繁琐等问题。本发明的目的在于提供一种血筛三项多色单管检测试剂盒。

为实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：一种血筛三项多色单管检测试剂盒，包括快速扩增酶系统和血筛三项检测的引物探针，所述血筛三项检测的引物探针由针对HBV、HCV和HIV血筛三项设计的特异性引物及对应的荧光探针组成，检测HBV上游引物和下游引物的序列分别为 SEQ1和SEQ4、探针序列为SEQ7，检测HCV上游引物和下游引物的序列分别为 SEQ10和SEQ13、探针序列为SEQ16, 检测HIV上游引物和下游引物的序列分别为 SEQ19和SEQ22、探针序列为SEQ25,所述检测HBV、HCV、HIV的探针，其5＇端均标记有荧光报告基团，其3＇端均标记有非荧光淬灭基团和MGB基团。

进一步的，所述HBV、HCV、HIV的检测探针，其5＇端标记的荧光报告基团选自下列基团：FAM、VIC、TEXAS RED、CY5、ROX。

进一步的，所述检测HBV、HCV、HIV的探针，其5＇端各标记有一种荧光报告基团，其标记的荧光报告基团互不相同。

进一步的，所述检测HBV、HCV、HIV的探针，其3＇端连接的MGB基团数量均可为2~10。

进一步的，所述需用到的总引物和探针的量比例为：上游引物：下游引物：探针为（8~10）：（8~10）：（3~5）。

进一步的，所述快速扩增酶系统包括dNTPS（U）、UNG酶、快速Taq酶、逆转录酶。

进一步的，所述dNTPS（U）中各种成分比例为：dATP：dTTP： dCTP: dGTP：dUTP=10：（1~3）：10：10：10。

进一步的，所述UNG酶、快速Taq酶、逆转录酶的用量分别为0.3U~1U、1U~5U、1U~5U。

进一步的，仅需在单个PCR反应管内即可同时检测是否存在病毒HBV、HCV、HIV。

优选的，所述需用到的总引物和探针的比例为：上游引物：下游引物：探针为8：8：3。

优选的，所述dNTPS（U）中各种成分比例为：dATP：dTTP： dCTP: dGTP：dUTP=10：1：10：10：10。

优选的，所述UNG酶、快速Taq酶、逆转录酶的用量分别为0.5U、3U、3U。

优选的，上述血筛三项多色单管检测试剂盒中使用的引物和探针的序列如下：